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新虫 (初入文坛)

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虫号: 1009524

[交流] 【求助/交流】【求助】细菌未知功能基因的克隆方法

各位达人，请教问题如下：

化合物A在WT菌株中的代谢途径是A->B->C.
在化学诱变株Mut中B->C的相关gene被阻断，有可能是调节gene，也有可能是功能gene。

其中化合物ABC已知，但只有A能买得到。
A->B的gene已知，B->C的功能gene未知。
WT菌株基因组未测序~（貌似花钱比较多）

请问有什么好的方法，克隆B-C的功能gene呢？
方法原理是什么？实验难度如何？可行性有多高？经费需求多少？

小弟金币不多，倾情奉献~

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1楼 2010-12-13 11:20:48

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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

参考文献给你，呵呵。有专门建库的试剂盒，不过比较昂贵，其实建那么小的一个库用不着这样的kit。自己找一个粘粒载体就OK了。

这个是我当初做宏基因组文库的时候参考过的一个nature protocol，建库的过程很详细，适合新手。

Construction of soil environmental DNA cosmid libraries and screening for clones that produce biologically active small molecules

全文链接：

http://ryu.jgi-psf.org/general/protocols/HMW_eDNA.pdf