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lhazrael

木虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】RNA干扰求助已有3人参与

最近刚接触到RNA干扰，做的是丝状真菌，问人家要了一个载体这载体的特点是有两个反向的启动子，直接用PCR从全基因组中得到目的基因的片段，然后插入到这两个启动子之间，就可以转录产生dsRNA，看起来挺方便的我想问下目的基因序列已知，怎么选择插入的片段呢？有什么特别的要求吗？比如说长度，GC含量之类的。实验室没人做过，迷茫得很请高手指导一下，不胜感激

附件是载体的图片

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1楼2010-12-07 09:54:02

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lhazrael

木虫 (正式写手)

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引用回帖:

Originally posted by randomqd at 2010-12-16 13:58:28:
中间由一茎环（loop）序列分隔的，组成发夹结构，由polⅢ启动子控制。随后在连上5-6个T作为RNA聚合酶Ⅲ的转录终止子。长度23个寡核苷酸可以更有效的；在启动子下游的酶切位点下方紧连一个C；ShRNA目的序列的第一个 ...

另外为什么在正义链和反义链序列上不能出现连续3个或以上的T呢？如果是设计几百bp的序列，很难没有3个或3个以上的T的

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9楼2010-12-16 16:09:10

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randomqd

木虫 (小有名气)

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两建议。

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):谢谢交流 2010-12-14 15:15:46

一、现在有许多设计siRNA的网站，只要你把要沉默的目的基因放进去，设好参数就好了。自己找人合成siRNA
给你个网址
http://sysbio.kribb.re.kr:8080/AsiDesigner/designedSirna.jsf
设计的原则，自己找。。
二、找公司设计。。。
没做过真菌的沉默，不晓得它和动物有区别没？

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