24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lhazrael

木虫 (正式写手)

应助: 7 (幼儿园)
金币: 4810.3
散金: 27
帖子: 742
在线: 289.9小时
虫号: 710246
注册: 2009-02-27
性别: MM
专业: 微生物遗传育种学

[交流] 【求助/交流】RNA干扰求助已有3人参与

最近刚接触到RNA干扰，做的是丝状真菌，问人家要了一个载体这载体的特点是有两个反向的启动子，直接用PCR从全基因组中得到目的基因的片段，然后插入到这两个启动子之间，就可以转录产生dsRNA，看起来挺方便的我想问下目的基因序列已知，怎么选择插入的片段呢？有什么特别的要求吗？比如说长度，GC含量之类的。实验室没人做过，迷茫得很请高手指导一下，不胜感激

附件是载体的图片

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

1楼 2010-12-07 09:54:02

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

lhazrael

木虫 (正式写手)

应助: 7 (幼儿园)
金币: 4810.3
散金: 27
帖子: 742
在线: 289.9小时
虫号: 710246
注册: 2009-02-27
性别: MM
专业: 微生物遗传育种学

这个类似于shRNA表达载体吧？也是用siRNA设计方法吗？我看设计出来的序列也就几十bp，可我看载体的参考文献，他插入了400bp呢，搞不太懂

赞一下

回复此楼

3楼2010-12-14 14:49:20

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

lhazrael

木虫 (正式写手)

应助: 7 (幼儿园)
金币: 4810.3
散金: 27
帖子: 742
在线: 289.9小时
虫号: 710246
注册: 2009-02-27
性别: MM
专业: 微生物遗传育种学

引用回帖:

Originally posted by randomqd at 2010-12-14 15:58:07:
呃，一楼给的是动物体内的shRNA设计，
你用的是真菌做为实验材料，沉默机制中的级联放大的作用，这和动物的有些不一样，可能一段大的dsRNA都可以吧，而且一般设计这么序列都是一下子设计四个序列，比较四个沉默效 ...

非常感谢，那这段序列是怎么选取呢？有专门的软件吗？

赞一下

回复此楼

6楼2010-12-15 08:39:30

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

lhazrael

木虫 (正式写手)

应助: 7 (幼儿园)
金币: 4810.3
散金: 27
帖子: 742
在线: 289.9小时
虫号: 710246
注册: 2009-02-27
性别: MM
专业: 微生物遗传育种学

引用回帖:

Originally posted by randomqd at 2010-12-16 13:58:28:
中间由一茎环（loop）序列分隔的，组成发夹结构，由polⅢ启动子控制。随后在连上5-6个T作为RNA聚合酶Ⅲ的转录终止子。长度23个寡核苷酸可以更有效的；在启动子下游的酶切位点下方紧连一个C；ShRNA目的序列的第一个 ...

有没有示意图呢？有点迷糊...

赞一下

回复此楼

8楼2010-12-16 14:17:56

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖