| 查看: 1577 | 回复: 10 | |||
lhazrael木虫 (正式写手)
|
[交流]
【求助/交流】RNA干扰求助 已有3人参与
|
|
最近刚接触到RNA干扰，做的是丝状真菌，问人家要了一个载体 这载体的特点是有两个反向的启动子，直接用PCR从全基因组中得到目的基因的片段，然后插入到这两个启动子之间，就可以转录产生dsRNA，看起来挺方便的 我想问下目的基因序列已知，怎么选择插入的片段呢？有什么特别的要求吗？比如说长度，GC含量之类的。实验室没人做过，迷茫得很 请高手指导一下，不胜感激 附件是载体的图片  |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有227人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于RNA干扰
已经有23人回复
- 【求助/交流】RNA提取结果分析
已经有42人回复
- 【求助/交流】RNA浓度和质量检测
已经有11人回复
- 【求助/交流】我是新手，请问T-DNA与RNAi的原理
已经有6人回复
- 【求助/交流】luciferase assay
已经有8人回复
- 【求助/交流】有关 RNA 的问题
已经有16人回复
- 【分享】《RNA干扰、编辑和修饰》【已搜索无重复】
已经有43人回复
- 【求助/交流】RNA干扰载体构建
已经有3人回复
randomqd
木虫 (小有名气)
樱花骑士
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2092.6
- 红花: 2
- 帖子: 246
- 在线: 34小时
- 虫号: 350527
- 注册: 2007-04-21
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
两建议。
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):谢谢交流 2010-12-14 15:15:46
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):谢谢交流 2010-12-14 15:15:46
|
一、现在有许多设计siRNA的网站，只要你把要沉默的目的基因放进去，设好参数就好了。自己找人合成siRNA 给你个网址 http://sysbio.kribb.re.kr:8080/AsiDesigner/designedSirna.jsf 设计的原则，自己找。。 二、找公司设计。。。 没做过真菌的沉默，不晓得它和动物有区别没？ |
2楼2010-12-07 11:03:05
lhazrael
木虫 (正式写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 4811.8
- 散金: 27
- 帖子: 742
- 在线: 290.3小时
- 虫号: 710246
- 注册: 2009-02-27
- 性别: MM
- 专业: 微生物遗传育种学
3楼2010-12-14 14:49:20
dhd997
荣誉版主 (文坛精英)
自由人，我型我秀！
- MolEPI: 5
- 应助: 24 (小学生)
- 贵宾: 4.021
- 金币: 22094.4
- 散金: 1968
- 红花: 45
- 沙发: 161
- 帖子: 22410
- 在线: 927.9小时
- 虫号: 500412
- 注册: 2008-02-13
- 性别: GG
- 专业: 生物化工与食品化工
- 管辖: 分子生物
4楼2010-12-14 15:16:09
randomqd
木虫 (小有名气)
樱花骑士
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2092.6
- 红花: 2
- 帖子: 246
- 在线: 34小时
- 虫号: 350527
- 注册: 2007-04-21
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
5楼2010-12-14 15:58:07
lhazrael
木虫 (正式写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 4811.8
- 散金: 27
- 帖子: 742
- 在线: 290.3小时
- 虫号: 710246
- 注册: 2009-02-27
- 性别: MM
- 专业: 微生物遗传育种学
6楼2010-12-15 08:39:30
randomqd
木虫 (小有名气)
樱花骑士
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2092.6
- 红花: 2
- 帖子: 246
- 在线: 34小时
- 虫号: 350527
- 注册: 2007-04-21
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
你的载体是两个方向转录两条，我之前做的是一条两个短反向重复序列，在动物细胞体内
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
|
中间由一茎环（loop）序列分隔的，组成发夹结构，由polⅢ启动子控制。随后在连上5-6个T作为RNA聚合酶Ⅲ的转录终止子。长度23个寡核苷酸可以更有效的；在启动子下游的酶切位点下方紧连一个C；ShRNA目的序列的第一个碱基必须是G以确保RNA聚合酶转录。如果选择的目的序列不以G开头，必须在紧连正义链的上游加一个G；中间的茎环，5'TCAAGAG3'序列最为有效(AMBION use)；5-6个T必须放置在shRNA插入片段尾部以确保RNA聚合酶III终止转录(stop)。；在正义链和反义链序列上不能出现连续3个或以上的T。 祝好 |
7楼2010-12-16 13:58:28
lhazrael
木虫 (正式写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 4811.8
- 散金: 27
- 帖子: 742
- 在线: 290.3小时
- 虫号: 710246
- 注册: 2009-02-27
- 性别: MM
- 专业: 微生物遗传育种学
8楼2010-12-16 14:17:56
lhazrael
木虫 (正式写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 4811.8
- 散金: 27
- 帖子: 742
- 在线: 290.3小时
- 虫号: 710246
- 注册: 2009-02-27
- 性别: MM
- 专业: 微生物遗传育种学
9楼2010-12-16 16:09:10
randomqd
木虫 (小有名气)
樱花骑士
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2092.6
- 红花: 2
- 帖子: 246
- 在线: 34小时
- 虫号: 350527
- 注册: 2007-04-21
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
10楼2010-12-16 16:42:26
10