应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】目的片段与载体连接不上
171/2返回列表12下一页
查看: 2151  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

eereer

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】目的片段与载体连接不上 已有11人参与

切胶回收的dna与载体连接转化后质粒PCR出来的结果是一800bp左右的条带，而我的目的片段长约1400。
重复了几次都是这样，哪位高手帮忙解决一下？谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-11-29 08:48:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+3):good 2010-11-29 09:54:14
酶切下质粒试试
PCR不能说明说明问题的，要不你把这800测个序~看看到底是说明原因？有可能是1400的部分呢
分子克隆的东东很邪门，我做的4kb的切胶回收，TA，结果大部分质粒都是连的2kb的雷死我了
赞一下(3人) 回复此楼
小木虫之有关部门负责人
2楼2010-11-29 08:52:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

eereer

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by scelab at 2010-11-29 08:52:57:
酶切下质粒试试
PCR不能说明说明问题的，要不你把这800测个序~看看到底是说明原因？有可能是1400的部分呢
分子克隆的东东很邪门，我做的4kb的切胶回收，TA，结果大部分质粒都是连的2kb的雷死我 ...

我做了酶切，结果完全一样，快晕了
赞一下 回复此楼
3楼2010-11-29 09:03:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feng__

金虫 (著名写手)

雾~蝶
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
载体和片段都重新处理，没准是哪里污染了
赞一下(1人) 回复此楼
会不会偶尔也会想起我....
4楼2010-11-29 09:35:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

若凡2012

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-29 09:54:29
可以让别人给你P下你的连接产物，有时手气也是个因素，我一同门就这样，很邪乎
。连接的片段一千多，连接的效率确实相对较低，你可以多调些克隆，多P，再就是多做几次连接。
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2010-11-29 09:43:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)
是载体自连了吗？然后连的都是空载片段，有没有可能啊？还是像上面说的测下序看看是啥，没准就是你要的目的片段的一部分也说不定呢，还是要用好一点的连接酶的。
赞一下 回复此楼
6楼2010-11-29 10:25:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by eereer at 2010-11-29 08:48:42:
切胶回收的dna与载体连接转化后质粒PCR出来的结果是一800bp左右的条带，而我的目的片段长约1400。
重复了几次都是这样，哪位高手帮忙解决一下？谢谢

lz确定连接之前的PCR产物片段大小正确么？
赞一下 回复此楼
我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
7楼2010-11-29 10:38:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不知道你切胶回收的dna是1400bp吗？
pcr是一般的验证方法，最保险的方法就是把重组质粒提取出来， 然后酶切，电泳，点上对照，看看大小对不对！
赞一下(2人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
8楼2010-11-29 11:23:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piaopiao233

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-11-29 11:46:45
引用回帖:
Originally posted by zhaohq1209 at 2010-11-29 10:38:57:


lz确定连接之前的PCR产物片段大小正确么？

这个确实要注意，你的PCR和载体在连接之前不是有割胶回收纯化吗，这一步一定要看看大小是否正确，要不然后期工作就白费了。

还有你酶切的时间哪，连接的时间，用的什么条件等等、

你要把自己的情况说的详细一点，清楚一点，这样才比较好解决问题。
赞一下(2人) 回复此楼
9楼2010-11-29 11:34:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

eereer

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by zhaohq1209 at 2010-11-29 10:38:57:


lz确定连接之前的PCR产物片段大小正确么？

PCR检验过正常
回复此楼
10楼2010-11-29 12:47:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 eereer 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿苏州大学材料工程（085601）专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +5 大火山小火山 2026-03-16 7/350 2026-03-17 10:26 by peike
[考研] 301求调剂 +3 A_JiXing 2026-03-16 3/150 2026-03-17 08:21 by 无际的草原
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨； 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 20:51 by 元子^0^
[考研] 286求调剂 +3 lemonzzn 2026-03-16 5/250 2026-03-16 20:43 by lemonzzn
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +3 生物工程调剂 2026-03-16 4/200 2026-03-16 20:13 by Wangjingyue
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗？ 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 311求调剂 +6 冬十三 2026-03-15 6/300 2026-03-16 08:00 by wang_dand
[考研] 255求调剂 +3 李嘉慧， 2026-03-12 4/200 2026-03-14 16:58 by 有只狸奴
[考研] 复试调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 328求调剂 +3 5201314Lsy！ 2026-03-13 6/300 2026-03-14 15:31 by hyswxzs
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 材料080500调剂求收留 +3 一颗meteor 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:54 by peike
[考研] 337一志愿华南理工0805材料求调剂 +7 mysdl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 22:43 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂 +4 芬达46 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:04 by ruiyingmiao
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +8 困于星晨 2026-03-12 10/500 2026-03-13 15:42 by ms629
[考研] 26考研求调剂 +5 丶宏Sir 2026-03-13 5/250 2026-03-13 13:05 by JourneyLucky
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭