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eereer

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】目的片段与载体连接不上 已有11人参与

切胶回收的dna与载体连接转化后质粒PCR出来的结果是一800bp左右的条带,而我的目的片段长约1400。
重复了几次都是这样,哪位高手帮忙解决一下?谢谢
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eereer

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by scelab at 2010-11-29 08:52:57:
酶切下质粒试试
PCR不能说明说明问题的,要不你把这800测个序~看看到底是说明原因?有可能是1400的部分呢
分子克隆的东东很邪门,我做的4kb的切胶回收,TA,结果大部分质粒都是连的2kb的雷死我 ...

我做了酶切,结果完全一样,快晕了
3楼2010-11-29 09:03:43
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+3):good 2010-11-29 09:54:14
酶切下质粒试试
PCR不能说明说明问题的,要不你把这800测个序~看看到底是说明原因?有可能是1400的部分呢
分子克隆的东东很邪门,我做的4kb的切胶回收,TA,结果大部分质粒都是连的2kb的雷死我了
小木虫之有关部门负责人
2楼2010-11-29 08:52:57
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feng__

金虫 (著名写手)

雾~蝶

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
载体和片段都重新处理,没准是哪里污染了
会不会偶尔也会想起我....
4楼2010-11-29 09:35:51
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若凡2012

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-29 09:54:29
可以让别人给你P下你的连接产物,有时手气也是个因素,我一同门就这样,很邪乎
。连接的片段一千多,连接的效率确实相对较低,你可以多调些克隆,多P,再就是多做几次连接。
5楼2010-11-29 09:43:17
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