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eereer

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】目的片段与载体连接不上 已有11人参与

切胶回收的dna与载体连接转化后质粒PCR出来的结果是一800bp左右的条带,而我的目的片段长约1400。
重复了几次都是这样,哪位高手帮忙解决一下?谢谢
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piaopiao233

金虫 (小有名气)

★ ★
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silicare(金币+1):谢谢参与 2010-11-29 11:46:45
引用回帖:
Originally posted by zhaohq1209 at 2010-11-29 10:38:57:


lz确定连接之前的PCR产物片段大小正确么?

这个确实要注意,你的PCR和载体在连接之前不是有割胶回收纯化吗,这一步一定要看看大小是否正确,要不然后期工作就白费了。

还有你酶切的时间哪,连接的时间,用的什么条件等等、

你要把自己的情况说的详细一点,清楚一点,这样才比较好解决问题。
9楼2010-11-29 11:34:08
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

★ ★ ★ ★
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dhd997(金币+3):good 2010-11-29 09:54:14
酶切下质粒试试
PCR不能说明说明问题的,要不你把这800测个序~看看到底是说明原因?有可能是1400的部分呢
分子克隆的东东很邪门,我做的4kb的切胶回收,TA,结果大部分质粒都是连的2kb的雷死我了
小木虫之有关部门负责人
2楼2010-11-29 08:52:57
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eereer

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by scelab at 2010-11-29 08:52:57:
酶切下质粒试试
PCR不能说明说明问题的,要不你把这800测个序~看看到底是说明原因?有可能是1400的部分呢
分子克隆的东东很邪门,我做的4kb的切胶回收,TA,结果大部分质粒都是连的2kb的雷死我 ...

我做了酶切,结果完全一样,快晕了
3楼2010-11-29 09:03:43
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feng__

金虫 (著名写手)

雾~蝶


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载体和片段都重新处理,没准是哪里污染了
会不会偶尔也会想起我....
4楼2010-11-29 09:35:51
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