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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酶切连接后的分子大小问题
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maxwell1988

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】酶切连接后的分子大小问题 已有11人参与

最近刚做了酶切、连接，基因是~0.5kb左右，载体是~5kb左右，连接产物转化后做了菌落PCR，PCR产物用1.0%琼脂糖凝胶电泳鉴定了一下。发现出现了很亮的条带，但本人不确定是不是就是我想要的重组质粒。所以，想问各位大侠们，这种基因和载体连接后的质粒大小大概是多少？
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perfectpig向前冲！别犹豫！
1楼 2010-11-22 15:08:32
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violet.zhou

木虫 (小有名气)
5.5Kb呗。。。。
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2楼2010-11-22 15:16:12
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maxwell1988

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by violet.zhou at 2010-11-22 15:16:12:
5.5Kb呗。。。。

目的片段与载体连接后是一种环化结构，这不能通过简单的相加得出结论的吧？
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perfectpig向前冲！别犹豫！
3楼2010-11-22 15:26:20
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水滴娃娃

铁虫 (初入文坛)
★ ★
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dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-23 11:09:22
在插入片段两端设计下引物，测个序，若有插入片段的序列 就重组成功，就可以用这次的样品当Marker了，呵呵。。。
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4楼2010-11-22 15:40:13
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violet.zhou

木虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
Originally posted by maxwell1988 at 2010-11-22 15:26:20:

目的片段与载体连接后是一种环化结构，这不能通过简单的相加得出结论的吧？

环化结构不影响实际的大小啊，不过就是跑胶时候从条带来分析，约是0.8倍的大小。
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5楼2010-11-23 09:22:45
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)
★ ★
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dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-23 11:09:45
直接提质粒酶切鉴定。单酶切应该为5.5kb，双酶切根据你自己选的酶了。
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6楼2010-11-23 10:48:27
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easthero

木虫 (小有名气)
★
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主要看你用的质粒和 使用的酶切位点，根据质粒上酶切位点可以用软件计算出切去质粒上原有片段后的连接载体的大小，再加上你的基因大小就是插入基因后的质粒大小了。
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7楼2010-11-23 13:56:43
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邓远洪dyh

新虫 (小有名气)
★
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这种环状5K多的载体估计在4K上一点点的样子，仅供参考哈
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8楼2010-11-23 15:19:34
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hutingting

银虫 (正式写手)
★
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可以设计引物，送测序，看有没有你的目的片段
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9楼2010-11-23 15:48:26
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gundamba

木虫 (小有名气)
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lstt09nk(金币+1):鼓励下 2010-11-24 13:03:24
1.找到一个合适的单酶切位点，切成线性化，然后跟MAKER对比
2.送去测序
3.也可以找个酶切位点，把质粒切成两部分，最好用你连接用的酶，然后跟MAKER对比，应该切出两条带，相加看看是不是你要的大小。
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10楼2010-11-24 12:57:03
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