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maxwell1988

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】酶切连接后的分子大小问题 已有11人参与

最近刚做了酶切、连接,基因是~0.5kb左右,载体是~5kb左右,连接产物转化后做了菌落PCR,PCR产物用1.0%琼脂糖凝胶电泳鉴定了一下。发现出现了很亮的条带,但本人不确定是不是就是我想要的重组质粒。所以,想问各位大侠们,这种基因和载体连接后的质粒大小大概是多少?
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perfectpig向前冲!别犹豫!
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violet.zhou

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by maxwell1988 at 2010-11-22 15:26:20:

目的片段与载体连接后是一种环化结构,这不能通过简单的相加得出结论的吧?

环化结构不影响实际的大小啊,不过就是跑胶时候从条带来分析,约是0.8倍的大小。
5楼2010-11-23 09:22:45
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maxwell1988

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by violet.zhou at 2010-11-22 15:16:12:
5.5Kb呗。。。。

目的片段与载体连接后是一种环化结构,这不能通过简单的相加得出结论的吧?
perfectpig向前冲!别犹豫!
3楼2010-11-22 15:26:20
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水滴娃娃

铁虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-23 11:09:22
在插入片段两端设计下引物,测个序,若有插入片段的序列 就重组成功,就可以用这次的样品当Marker了,呵呵。。。
4楼2010-11-22 15:40:13
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-23 11:09:45
直接提质粒酶切鉴定。单酶切应该为5.5kb,双酶切根据你自己选的酶了。
6楼2010-11-23 10:48:27
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