应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教3000bp的条带的连接问题
51/1返回列表
查看: 2827  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

kakaqa

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】请教3000bp的条带的连接问题

我克隆基因扩增得到了一个3000bp的片段，现在问题来了，我们实验室只有pMD18-T这种载体，听说这种载体连接3000bp的片段有点难度，但也能连上，请教用这种载体连过3000bp条带的高手，连接体系是怎样的，多少度需要连接多久，我已经做了3次了，结果都是失败，相当的郁闷啊！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-11-11 18:59:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pushizi

木虫 (小有名气)
这个跟你的基因也有关系的，要是二级结构复杂就难办了
我们实验室一直都用1:3-1:5（摩尔比），4000 bp多的都有连上的，但是有时3kb的也有连不上，送测序都测得费劲，只要你没遇上那种基因，一般连个2小时，转化时感受态效率高点就没事，祝你成功
赞一下 回复此楼
16楼2010-11-14 22:43:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

jackiechubut

木虫 (小有名气)
2200左右的倒是连过，不过没用这个T载体，实在连不上你可以考虑购买其他的T载体连接下。
赞一下 回复此楼
2楼2010-11-11 21:10:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)
★
amisking(金币+1):鼓励交流！ 2010-11-11 21:45:09
3kb有点大，你是用普通TAQ做的吗？最好用高保真酶把产物纯化后再加普通TAQ跟dNTPs 72度半小时，再连pMD18-T 16度反应五六个小时。我实验室有这么做的结果不错。希望你成功。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-11-11 21:16:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kakaqa

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by lvbobo823 at 2010-11-11 21:16:30:
3kb有点大，你是用普通TAQ做的吗？最好用高保真酶把产物纯化后再加普通TAQ跟dNTPs 72度半小时，再连pMD18-T 16度反应五六个小时。我实验室有这么做的结果不错。希望你成功。

我是用TAKARA的EXtaq做的，连了好多次都连不上，回收的条带很亮，但就是连接不上，真是郁闷死了，我是连接过夜的，现在又做了一次，希望能成功。哎，没办法，就碰运气了，载体本身只有2.7kb，希望这次运气不错。
赞一下 回复此楼
4楼2010-11-12 08:18:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭