24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

kakaqa

铜虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 91.8
帖子: 11
在线: 13.2小时
虫号: 997081

[交流] 【求助/交流】请教3000bp的条带的连接问题

我克隆基因扩增得到了一个3000bp的片段，现在问题来了，我们实验室只有pMD18-T这种载体，听说这种载体连接3000bp的片段有点难度，但也能连上，请教用这种载体连过3000bp条带的高手，连接体系是怎样的，多少度需要连接多久，我已经做了3次了，结果都是失败，相当的郁闷啊！！！

回复此楼

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有177人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

虚心请教关于平—粘末端的连接问题已经有18人回复
请教一下连接与转化问题！已经有11人回复
请教一下载体连接的问题已经有5人回复
胶回收产物连接转化后菌液PCR电泳条带出现问题已经有8人回复
请教关于宝公司pMD18T连接问题已经有4人回复
【求助/交流】PCR产物测序总是不对已经有13人回复
【求助/交流】关于酶切问题已经有10人回复
【求助/交流】TA克隆已经有15人回复
【求助/交流】请教连接转化方面的问题已经有14人回复
【求助/交流】以连接产物做模板扩增此连接产物，有问题请教各位达人~麻烦您帮忙分析下已经有9人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:
查看全部散金贴

1楼2010-11-11 18:59:10

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

kakaqa

铜虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 91.8
帖子: 11
在线: 13.2小时
虫号: 997081

引用回帖:

Originally posted by lvbobo823 at 2010-11-11 21:16:30:
3kb有点大，你是用普通TAQ做的吗？最好用高保真酶把产物纯化后再加普通TAQ跟dNTPs 72度半小时，再连pMD18-T 16度反应五六个小时。我实验室有这么做的结果不错。希望你成功。

我是用TAKARA的EXtaq做的，连了好多次都连不上，回收的条带很亮，但就是连接不上，真是郁闷死了，我是连接过夜的，现在又做了一次，希望能成功。哎，没办法，就碰运气了，载体本身只有2.7kb，希望这次运气不错。