24小时热门版块排行榜    

查看: 2766  |  回复: 11

lovecaowei

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】关于液相色谱 5个标准样 出峰重叠问题?


各位高人,请教个问题
我今天下午做的实验是测定5‘-核苷酸
我总共有5个标准样,用的混标法

流动相:是甲醇1:1 (体积)0.05mol/L磷酸二氢钾溶液,刚开始是15分钟甲醇冲洗柱子,然后15分钟流动相冲洗,然后5ul进样
结果,就在3分钟左右的时候出了2个峰,其余的到20分钟都没出峰

之后我又把每个样品单独跑了一遍,结果是第一种:出峰时间是3.615S,第二种是3.598S,第三种是3.625S,第四种是3.576S,第五种是3.616S时,出峰。
本人新手,我感觉好像是峰都重叠在一起了

请问各位一下,怎么把这5种混标时,出峰分离开来。
多谢!!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lovecaowei

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
铁甲骑兵(金币+3):嘿嘿,送你3个金币,奖励发处女帖。以后经常上浮冒个泡啊。 2010-10-24 07:20:41
自己沙发,不是本人不给金币,是我金币实在太少了,因为我总潜水。
2楼2010-10-22 17:26:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

北京绿百草

新虫 (小有名气)


铁甲骑兵(金币+1):指出了问题的关键。 2010-10-24 07:19:41
自己抢沙发,肯定是重叠在一起啦,改变一下流动相,应该要有机相比例高些吧
3楼2010-10-22 17:35:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lovecaowei

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 北京绿百草 at 2010-10-22 17:35:53:
自己抢沙发,肯定是重叠在一起啦,改变一下流动相,应该要有机相比例高些吧

最后我也改流动相了,第二次做的时候我把甲醇跳到10%,磷酸二氢钾伟90%就出了四个峰,还是少了一个峰,然后在13分钟时候把甲醇又调到了50%,这时候出现了第5个峰,不知道这种方法,是叫,梯度洗脱吗?
4楼2010-10-22 17:48:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ajshen

木虫 (小有名气)


铁甲骑兵(金币+1):个人看法很对哦。 2010-10-24 07:21:03
你是什么柱子,如果是很快就出峰肯定是流动相极性太高了吧,可以降低流动相的极性,分不开的话应该试试梯度洗脱是可以分开的,不可能用等度都能分开,特别是你单独样品走的时候时间好像也差不多,个人看法哦!
JESSICA
5楼2010-10-23 22:00:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuliu_521

新虫 (初入文坛)

5‘-核苷酸

酸类的化合物极性大,你的流动相得比例要降低,梯度可以的,你可以前几分梯度洗脱的范围变化小点,然后再加大一点看看
6楼2010-10-23 22:23:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuliu_521

新虫 (初入文坛)


铁甲骑兵(金币+1):很好的思路。 2010-10-24 07:21:42
最后我也改流动相了,第二次做的时候我把甲醇跳到10%,磷酸二氢钾伟90%就出了四个峰,还是少了一个峰,然后在13分钟时候把甲醇又调到了50%,这时候出现了第5个峰,不知道这种方法,是叫,梯度洗脱吗?
本文来自: 小木虫论坛 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2517879&pid=1414909&page=1#pid1414909
还有,你的梯度的方法是要一开始就设置好的,你好像是13分钟的时候改的,这样子的话,我个人觉得你将来重复试验的时候有点困难。可以一开始的时候前几分梯度洗脱的范围变化小点,然后后段时间加大看看 如0-10min 5%甲醇-10%甲醇,10-20分10%-60%看看。当然我只是举个例子,不知道你的情况了
7楼2010-10-23 22:28:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fd114a

铁杆木虫 (正式写手)


铁甲骑兵(金币+1):欢迎回帖参与讨论。 2010-10-24 07:22:02
用梯度洗脱,你应该用的是等度洗脱吧!改变流动相中的物质比例即可,可以自己调,多试几次就可一找到最佳的比例了!
努力+运气=成功!
8楼2010-10-24 00:05:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pkuleaf

捐助贵宾 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by lovecaowei at 2010-10-22 17:48:08:


最后我也改流动相了,第二次做的时候我把甲醇跳到10%,磷酸二氢钾伟90%就出了四个峰,还是少了一个峰,然后在13分钟时候把甲醇又调到了50%,这时候出现了第5个峰,不知道这种方法,是叫,梯度洗脱吗?

根据你前面单标的保留时间来看,第五个峰不太会跟前面出峰时间差那么多,四个峰可能是第一个峰(3.615)和第五个峰(3.616)还是重叠在一起了,13分钟出的那个峰可能是溶剂比例突然剧烈变化造成的波动
9楼2010-10-24 08:56:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

q123ppp321

银虫 (初入文坛)

以上正解,新手感觉是因为柱子和流动相没有选好而已,本人新手。。
10楼2010-10-24 10:33:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lovecaowei 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 304求调剂 +11 小熊joy 2026-03-14 12/600 2026-03-18 09:59 by macy2011
[考研] 0703化学336分求调剂 +6 zbzihdhd 2026-03-15 7/350 2026-03-18 09:53 by zhukairuo
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +4 手机用户 2026-03-17 4/200 2026-03-18 09:30 by b不易
[考研] 311求调剂 +10 冬十三 2026-03-15 11/550 2026-03-18 09:04 by zhukairuo
[考研] 085600材料与化工求调剂 +5 绪幸与子 2026-03-17 5/250 2026-03-17 16:40 by laoshidan
[考研] 289求调剂 +6 步川酷紫123 2026-03-11 6/300 2026-03-17 10:23 by Sammy2
[考研] 274求调剂 +5 时间点 2026-03-13 5/250 2026-03-17 07:34 by 热情沙漠
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 中科大材料与化工319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:10 by ms629
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化,一志愿:哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[考研] 【0703化学调剂】-一志愿华中师范大学-六级475 +5 Becho359 2026-03-11 5/250 2026-03-14 11:35 by 哦哦123
[基金申请] 有必要更换申报口吗 20+3 fannyamoy 2026-03-11 3/150 2026-03-14 00:52 by zhanghaozhu
[考研] 工科,求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂 +4 芬达46 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:04 by ruiyingmiao
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
[考研] 290求调剂 +7 ADT 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:17 by JourneyLucky
[考研] 0856化学工程280分求调剂 +4 shenzxsn 2026-03-11 4/200 2026-03-13 11:55 by ymwdoctor
信息提示
请填处理意见