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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【求助】关于液相色谱 5个标准样 出峰重叠问题？
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lovecaowei

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】关于液相色谱 5个标准样 出峰重叠问题？


各位高人，请教个问题
我今天下午做的实验是测定5‘-核苷酸
我总共有5个标准样，用的混标法

流动相：是甲醇1：1 （体积）0.05mol/L磷酸二氢钾溶液,刚开始是15分钟甲醇冲洗柱子，然后15分钟流动相冲洗，然后5ul进样
结果，就在3分钟左右的时候出了2个峰，其余的到20分钟都没出峰

之后我又把每个样品单独跑了一遍，结果是第一种：出峰时间是3.615S，第二种是3.598S，第三种是3.625S，第四种是3.576S，第五种是3.616S时，出峰。
本人新手，我感觉好像是峰都重叠在一起了

请问各位一下，怎么把这5种混标时，出峰分离开来。
多谢！！！！
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1楼 2010-10-22 17:25:14
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pkuleaf

捐助贵宾 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lovecaowei at 2010-10-22 17:48:08:


最后我也改流动相了，第二次做的时候我把甲醇跳到10%，磷酸二氢钾伟90%就出了四个峰，还是少了一个峰，然后在13分钟时候把甲醇又调到了50%，这时候出现了第5个峰，不知道这种方法，是叫，梯度洗脱吗？

根据你前面单标的保留时间来看，第五个峰不太会跟前面出峰时间差那么多，四个峰可能是第一个峰(3.615)和第五个峰(3.616)还是重叠在一起了，13分钟出的那个峰可能是溶剂比例突然剧烈变化造成的波动
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9楼2010-10-24 08:56:54
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lovecaowei

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
铁甲骑兵(金币+3):嘿嘿，送你3个金币，奖励发处女帖。以后经常上浮冒个泡啊。 2010-10-24 07:20:41
自己沙发，不是本人不给金币，是我金币实在太少了，因为我总潜水。
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2楼2010-10-22 17:26:30
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北京绿百草

新虫 (小有名气)
★
铁甲骑兵(金币+1):指出了问题的关键。 2010-10-24 07:19:41
自己抢沙发，肯定是重叠在一起啦，改变一下流动相，应该要有机相比例高些吧
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-10-22 17:35:53
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lovecaowei

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 北京绿百草 at 2010-10-22 17:35:53:
自己抢沙发，肯定是重叠在一起啦，改变一下流动相，应该要有机相比例高些吧

最后我也改流动相了，第二次做的时候我把甲醇跳到10%，磷酸二氢钾伟90%就出了四个峰，还是少了一个峰，然后在13分钟时候把甲醇又调到了50%，这时候出现了第5个峰，不知道这种方法，是叫，梯度洗脱吗？
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4楼2010-10-22 17:48:08
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