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lovecaowei

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】关于液相色谱 5个标准样 出峰重叠问题?


各位高人,请教个问题
我今天下午做的实验是测定5‘-核苷酸
我总共有5个标准样,用的混标法

流动相:是甲醇1:1 (体积)0.05mol/L磷酸二氢钾溶液,刚开始是15分钟甲醇冲洗柱子,然后15分钟流动相冲洗,然后5ul进样
结果,就在3分钟左右的时候出了2个峰,其余的到20分钟都没出峰

之后我又把每个样品单独跑了一遍,结果是第一种:出峰时间是3.615S,第二种是3.598S,第三种是3.625S,第四种是3.576S,第五种是3.616S时,出峰。
本人新手,我感觉好像是峰都重叠在一起了

请问各位一下,怎么把这5种混标时,出峰分离开来。
多谢!!!!
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lovecaowei

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 北京绿百草 at 2010-10-22 17:35:53:
自己抢沙发,肯定是重叠在一起啦,改变一下流动相,应该要有机相比例高些吧

最后我也改流动相了,第二次做的时候我把甲醇跳到10%,磷酸二氢钾伟90%就出了四个峰,还是少了一个峰,然后在13分钟时候把甲醇又调到了50%,这时候出现了第5个峰,不知道这种方法,是叫,梯度洗脱吗?
4楼2010-10-22 17:48:08
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lovecaowei

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
铁甲骑兵(金币+3):嘿嘿,送你3个金币,奖励发处女帖。以后经常上浮冒个泡啊。 2010-10-24 07:20:41
自己沙发,不是本人不给金币,是我金币实在太少了,因为我总潜水。
2楼2010-10-22 17:26:30
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北京绿百草

新虫 (小有名气)


铁甲骑兵(金币+1):指出了问题的关键。 2010-10-24 07:19:41
自己抢沙发,肯定是重叠在一起啦,改变一下流动相,应该要有机相比例高些吧
3楼2010-10-22 17:35:53
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ajshen

木虫 (小有名气)


铁甲骑兵(金币+1):个人看法很对哦。 2010-10-24 07:21:03
你是什么柱子,如果是很快就出峰肯定是流动相极性太高了吧,可以降低流动相的极性,分不开的话应该试试梯度洗脱是可以分开的,不可能用等度都能分开,特别是你单独样品走的时候时间好像也差不多,个人看法哦!
JESSICA
5楼2010-10-23 22:00:52
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