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lovecaowei

新虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助】关于液相色谱 5个标准样出峰重叠问题？

各位高人，请教个问题
我今天下午做的实验是测定5‘-核苷酸
我总共有5个标准样，用的混标法

流动相：是甲醇1：1 （体积）0.05mol/L磷酸二氢钾溶液,刚开始是15分钟甲醇冲洗柱子，然后15分钟流动相冲洗，然后5ul进样
结果，就在3分钟左右的时候出了2个峰，其余的到20分钟都没出峰

之后我又把每个样品单独跑了一遍，结果是第一种：出峰时间是3.615S，第二种是3.598S，第三种是3.625S，第四种是3.576S，第五种是3.616S时，出峰。
本人新手，我感觉好像是峰都重叠在一起了

请问各位一下，怎么把这5种混标时，出峰分离开来。
多谢！！！！

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1楼 2010-10-22 17:25:14

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liuliu_521

新虫 (初入文坛)

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★
铁甲骑兵(金币+1):很好的思路。 2010-10-24 07:21:42

最后我也改流动相了，第二次做的时候我把甲醇跳到10%，磷酸二氢钾伟90%就出了四个峰，还是少了一个峰，然后在13分钟时候把甲醇又调到了50%，这时候出现了第5个峰，不知道这种方法，是叫，梯度洗脱吗？
本文来自: 小木虫论坛 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2517879&pid=1414909&page=1#pid1414909
还有，你的梯度的方法是要一开始就设置好的，你好像是13分钟的时候改的，这样子的话，我个人觉得你将来重复试验的时候有点困难。可以一开始的时候前几分梯度洗脱的范围变化小点，然后后段时间加大看看如0-10min 5%甲醇-10%甲醇，10-20分10%-60%看看。当然我只是举个例子，不知道你的情况了