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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于原核表达中稀有密码子的问题
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zxd95

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】关于原核表达中稀有密码子的问题 已有5人参与

真核基因的原核表达中经常出现稀有密码子问题，导致真核基因不表达的现象。去年我做了pET32a-AtPAP1在BL21（DE3）的原核表达，结果是能够表达的，只是80%的是包涵体，20%的是可溶性蛋白。我现在使用在线密码子分析软件进行分析，结果表明稀有密码子共35个，其中大肠杆菌不能合成的有24个 (AUA, AGG, AGA, CUA,CCC, GGA)= 24/248=9.68%。请问各位虫友，既然大肠杆菌不能合成这些氨基酸，为什么还能够进行原核表达出完整的蛋白？？？？？
附：
AtPAP1
ATG GAG GGT TCG TCC AAA GGG CTG CGA AAA GGT GCT TGG ACT ACT GAA GAA GAT AGT CTC TTG AGA CAG TGC ATT AAT AAG TAT GGA GAA GGC AAA TGG CAC CAA GTT CCT GTAAGA GCT GGG CUA AAC CGG TGC AGG AAA AGT TGT AGA TTA AGA TGG TTG AAC TAT TTG AAG CCA AGT ATC AAG AGA GGA AAA CTT AGC TCT GAT GAA GTC GAT CTT CTT CTT CGC CTT CAT AGG CTT CUA GGG AAT AGG TGG TCT TTA ATT GCT GGA AGA TTA CCT GGT CGG ACC GCA AAT GAC GTC AAG AAT TAC TGG AAC ACT CAT CTG AGT AAG AAA CAT GAA CCG TGT TGT AAG AUA AAG ATG AAA AAG AGA GAC ATT ACG CCC ATT CCT ACA ACA CCG GCA CUA AAA AAC AAT GTT TAT AAG CCT CGA CCT CGA TCC TTC ACA GTT AAC AAC GAC TGC AAC CAT CTC AAT GCC CCA CCA AAA GTT GAC GTT AAT CCT CCA TGC CTT GGA CTT AAC ATC AAT AAT GTT TGT GAC AAT AGT ATC AUA TAC AAC AAA GAT AAG AAG AAA GAC CAA CUA GTG AAT AAT TTG ATT GAT GGA GAT AAT ATG TGG TTA GAG AAA TTC CUA GAG GAA AGC CAA GAG GTA GAT ATT TTG GTT CCT GAA GCG ACG ACA ACA GAA AAG GGG GAC ACC TTG GCT TTT GAC GTT GAT CAA CTT TGG AGT CTT TTC GAT GGA GAG ACT GTG AAA TTT GAT
744bp  248aa
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追梦的人
1楼 2010-10-13 21:58:36
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)
★
scelab(金币+1):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-10-13 22:56:27
有专门的适合稀有密码子表达的菌株，Rosetta，公司有卖。很有用的。
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2楼2010-10-13 22:04:19
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biodadiao

铜虫 (小有名气)
★ ★
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-10-13 22:56:36
稀有密码子只是代表该密码子在大肠杆菌中的转运RNA的比例比较少，可能占到的比例只有1％～10％之间，并不意味着完全没有，所以还会有部分可溶表达。
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3楼2010-10-13 22:15:08
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川
帮顶
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海纳百川止于至善
4楼2011-04-25 15:52:35
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roomofxw

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励回帖 2011-04-25 18:39:35
稀有不代表没有
没有稀有密码子不代表就能表达，大片稀有密码子也不代表就不能表达
想要增加可溶，优化一下表达条件
生物就是那么玄妙，妄图控制他，他能玩死你
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5楼2011-04-25 18:16:03
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jasco

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by roomofxw at 2011-04-25 18:16:03:
稀有不代表没有
没有稀有密码子不代表就能表达，大片稀有密码子也不代表就不能表达
想要增加可溶，优化一下表达条件
生物就是那么玄妙，妄图控制他，他能玩死你

吼吼，正解！
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6楼2011-04-26 16:28:35
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花的泪

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
再怎么优化条件，也不会好到哪去。最好是换表达菌株了，Rosetta表达菌株就是专门用来表达稀有密码子的基因的。
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7楼2011-04-29 16:34:11
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1005lys

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你好，我想问一下ATPAP1是从花序中克隆的还是叶子中？
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8楼2018-03-13 15:16:08
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zxd95

至尊木虫 (著名写手)
从红色叶片或红色突变体中直接克隆。

发自小木虫Android客户端
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追梦的人
9楼2018-03-14 07:20:47
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