应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】重组蛋白表达
101/1返回列表
查看: 1595  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lihaoexe

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】重组蛋白表达 已有7人参与

最近克隆表达好几个蛋白，效果都不理想，有的不表达，有的是包涵体，很郁闷，我用的是pET28a（+）载体，据说histag对表达很有影响，是不是这个问题啊？大家有好的经验分享一下哈
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-09-15 16:13:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sfxt001

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
在诱导表达的条件充分优化的前提下，如果出现这些问题，通常跟你要表达的蛋白本身的性质有关系
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-09-15 16:18:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+2):内在决定外在啊 2010-09-15 23:38:02
引用回帖:
Originally posted by lihaoexe at 2010-09-15 16:13:04:
最近克隆表达好几个蛋白，效果都不理想，有的不表达，有的是包涵体，很郁闷，我用的是pET28a（+）载体，据说histag对表达很有影响，是不是这个问题啊？大家有好的经验分享一下哈

我这一年多来构建了近四十个表达载体，得出的结论是蛋白的表达情况核心在于蛋白本身性质，与载体、诱导条件的关系相对较小。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-09-15 16:29:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihaoexe

银虫 (小有名气)
据说带histag的包涵体做変复性也有影响，有知道的吗
赞一下 回复此楼
4楼2010-09-15 16:40:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
his tag就6个氨基酸，对你的蛋白影响会很小的
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-09-15 17:20:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yatingwang_2005

铁虫 (小有名气)

我的怎么回事呢

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有时我的CDNA 有,但是WB没有,为什么?
有时诱导后比之前还低--CDNA
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-09-15 17:43:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

米菲的旋律

木虫 (著名写手)

Always Keep The Faith！
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-09-15 23:38:10
引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-09-15 17:20:50:
his tag就6个氨基酸，对你的蛋白影响会很小的

顶2，3，5楼，没错就是这样。

蛋白能否成功表达纯化，目前世界上都没有一种万能的方法，只能靠不断尝试变换载体，宿主，buffer等条件了。（比如我实验室的某蛋白，在大肠可以表达，在酵母就不行。）
赞一下(2人) 回复此楼
物必先腐而后虫生
7楼2010-09-15 17:51:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihaoexe

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-09-15 17:20:50:
his tag就6个氨基酸，对你的蛋白影响会很小的

我们实验室有一个蛋白，加histag时表达包涵体，而且复性不好，但是去掉histag就是可溶表达的
赞一下 回复此楼
8楼2010-09-15 18:12:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jia1012428

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我的蛋白带his-tag，表达出来就是包涵体，还有很多时候不表达，不知道是怎么回事？
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-09-15 19:05:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

米菲的旋律

木虫 (著名写手)

Always Keep The Faith！
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by lihaoexe at 2010-09-15 18:12:35:

我们实验室有一个蛋白，加histag时表达包涵体，而且复性不好，但是去掉histag就是可溶表达的

我也遇到过。
可是不带标签的蛋白，纯化很麻烦的。
赞一下(1人) 回复此楼
物必先腐而后虫生
10楼2010-09-16 09:58:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lihaoexe 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +18 羊腰板 2026-08-21 21/1050 2026-08-25 10:24 by ma0526
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +5 process2012 2026-08-23 7/350 2026-08-25 09:42 by huixian257
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +17 kkkl_v 2026-08-19 18/900 2026-08-25 09:41 by windflowerwy
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] 人气不行了 +10 fansofjerry 2026-08-21 10/500 2026-08-24 21:03 by zhanghaozhu
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 估计是周四 +4 archvillain 2026-08-18 4/200 2026-08-24 13:53 by zzuzxg
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭