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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】重组蛋白表达
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lihaoexe

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】重组蛋白表达 已有7人参与

最近克隆表达好几个蛋白，效果都不理想，有的不表达，有的是包涵体，很郁闷，我用的是pET28a（+）载体，据说histag对表达很有影响，是不是这个问题啊？大家有好的经验分享一下哈
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1楼 2010-09-15 16:13:04
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sfxt001

木虫 (小有名气)
★
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在诱导表达的条件充分优化的前提下，如果出现这些问题，通常跟你要表达的蛋白本身的性质有关系
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2楼2010-09-15 16:18:05
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月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
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scelab(金币+2):内在决定外在啊 2010-09-15 23:38:02
引用回帖:
Originally posted by lihaoexe at 2010-09-15 16:13:04:
最近克隆表达好几个蛋白，效果都不理想，有的不表达，有的是包涵体，很郁闷，我用的是pET28a（+）载体，据说histag对表达很有影响，是不是这个问题啊？大家有好的经验分享一下哈

我这一年多来构建了近四十个表达载体，得出的结论是蛋白的表达情况核心在于蛋白本身性质，与载体、诱导条件的关系相对较小。
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3楼2010-09-15 16:29:01
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lihaoexe

银虫 (小有名气)
据说带histag的包涵体做変复性也有影响，有知道的吗
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4楼2010-09-15 16:40:36
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jasco

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
his tag就6个氨基酸，对你的蛋白影响会很小的
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5楼2010-09-15 17:20:50
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yatingwang_2005

铁虫 (小有名气)

我的怎么回事呢

★
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有时我的CDNA 有,但是WB没有,为什么?
有时诱导后比之前还低--CDNA
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6楼2010-09-15 17:43:20
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米菲的旋律

木虫 (著名写手)

Always Keep The Faith！
★ ★ ★
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scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-09-15 23:38:10
引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-09-15 17:20:50:
his tag就6个氨基酸，对你的蛋白影响会很小的

顶2，3，5楼，没错就是这样。

蛋白能否成功表达纯化，目前世界上都没有一种万能的方法，只能靠不断尝试变换载体，宿主，buffer等条件了。（比如我实验室的某蛋白，在大肠可以表达，在酵母就不行。）
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物必先腐而后虫生
7楼2010-09-15 17:51:11
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lihaoexe

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-09-15 17:20:50:
his tag就6个氨基酸，对你的蛋白影响会很小的

我们实验室有一个蛋白，加histag时表达包涵体，而且复性不好，但是去掉histag就是可溶表达的
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8楼2010-09-15 18:12:35
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jia1012428

铜虫 (小有名气)
★
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我的蛋白带his-tag，表达出来就是包涵体，还有很多时候不表达，不知道是怎么回事？
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9楼2010-09-15 19:05:03
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米菲的旋律

木虫 (著名写手)

Always Keep The Faith！
★
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引用回帖:
Originally posted by lihaoexe at 2010-09-15 18:12:35:

我们实验室有一个蛋白，加histag时表达包涵体，而且复性不好，但是去掉histag就是可溶表达的

我也遇到过。
可是不带标签的蛋白，纯化很麻烦的。
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物必先腐而后虫生
10楼2010-09-16 09:58:31
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