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lihaoexe

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】重组蛋白表达 已有7人参与

最近克隆表达好几个蛋白,效果都不理想,有的不表达,有的是包涵体,很郁闷,我用的是pET28a(+)载体,据说histag对表达很有影响,是不是这个问题啊?大家有好的经验分享一下哈
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米菲的旋律

木虫 (著名写手)

Always Keep The Faith!


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by lihaoexe at 2010-09-15 18:12:35:

我们实验室有一个蛋白,加histag时表达包涵体,而且复性不好,但是去掉histag就是可溶表达的

我也遇到过。
可是不带标签的蛋白,纯化很麻烦的。
物必先腐而后虫生
10楼2010-09-16 09:58:31
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sfxt001

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
在诱导表达的条件充分优化的前提下,如果出现这些问题,通常跟你要表达的蛋白本身的性质有关系
2楼2010-09-15 16:18:05
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月月大可

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+2):内在决定外在啊 2010-09-15 23:38:02
引用回帖:
Originally posted by lihaoexe at 2010-09-15 16:13:04:
最近克隆表达好几个蛋白,效果都不理想,有的不表达,有的是包涵体,很郁闷,我用的是pET28a(+)载体,据说histag对表达很有影响,是不是这个问题啊?大家有好的经验分享一下哈

我这一年多来构建了近四十个表达载体,得出的结论是蛋白的表达情况核心在于蛋白本身性质,与载体、诱导条件的关系相对较小。
3楼2010-09-15 16:29:01
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lihaoexe

银虫 (小有名气)

据说带histag的包涵体做変复性也有影响,有知道的吗
4楼2010-09-15 16:40:36
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