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niuniu2010

铜虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】带GST标签的重组蛋白的纯化？已有11人参与

将带GST标签的重组蛋白进行酶切，怎样分离GST标签，目的蛋白及所用的酶切酶？能否用分子筛、跑胶等方法分离且保持目的蛋白的活性？

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1楼2010-09-10 16:27:36

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hugang2004_2000

木虫 (正式写手)

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★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):感谢分享~ 2010-09-17 17:07:54

用那种带滤膜的离心管不行吗？如果用酶切后混合物过GST标签柱，那酶切用的酶不是也还混在目的蛋白里吗？但是如果用离心管的话，大于20KDa 的都可以被挡在离心管里，而你的蛋白石16左右，就可以穿过离心管的滤膜。把离心管外的滤液收集再用冷冻干燥或者再用10KDa过滤范围的离心管再浓缩一次，计算一下浓度，就可以测活性了。
刚才看了实验室里的那个离心管，全名是：Amicon Ultra centrifugal filter devices. 密理博的产品。

[ Last edited by hugang2004_2000 on 2010-9-17 at 12:24 ]