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felix2004

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】sds胶晕开的问题

各位帮帮忙,看看我这个胶是怎么回事,小分子量区域歪歪扭扭,还有marker晕的很开是不是脱色时间太长的原因,还是胶或者marker本身的原因。破菌上清和透析液的蛋白条带很淡,怎么解决?

怎样的胶才能符合发文章的需要啊?
如果有sds的详细资料也请发我一份,感谢大家
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silicare

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felix2004(金币+1):谢谢参与
貌似marker有问题
2楼2010-09-10 11:41:51
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hflf

金虫 (小有名气)


felix2004(金币+1):谢谢参与
felix2004(金币+1):谢谢 2010-09-10 11:47:51
marker降解了吧,我们这边也是,后来用了-20°刚拿出来的marker就好了,蛋白胶也出现过扭曲的,可能是玻璃板没洗干净,
行到水穷处,坐看云起时!
3楼2010-09-10 11:45:41
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sdqzsdqz

木虫 (著名写手)


felix2004(金币+1):谢谢参与
跑胶的电压太高导致热量太多(或者是BUFFER是用的旧的),所以低温跑会好很多的。
4楼2010-09-10 12:00:20
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2009227004

金虫 (正式写手)

★ ★
felix2004(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+1):鼓励交流~ 2010-09-10 15:31:37
Marker降解了,可以拿去加热一下!!!100摄氏度10分钟,至少条带,其他的都还好,有可能是胶没有混匀!!或者你的样品里面含有干扰试剂!!破坏了蛋白的结构!!颜色淡的话,你烤蓝的时候多烤一会!!!
当别人都在假装正经的时候,我就假装不正经。
5楼2010-09-10 13:26:03
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烟大考研

金虫 (正式写手)


felix2004(金币+1):谢谢参与
felix2004(金币+1): 2010-09-10 18:45:56
看你的胶,感觉有好多污染点,是不是试剂没有过滤,我们这边用的试剂都经过0.45um过滤的,跑出来就没有点了。
Marker降解了,就是这种情况,我们最近做实验也出现过Marker晕的现象,结果用新Marker一带就对比出来了,建议换新Marker。
破菌后,上样时间要尽量短,防止胞内酶降解。
另外你的染色还是可以的,已经不浅了,就是蛋白量少。蛋白可以浓缩下。
心信其可行,则移山填海之难,终有成功之日;心信其不可行,则反掌折枝之易,亦无收效之期
6楼2010-09-10 15:47:34
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