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【求助/交流】小鼠单抗做WB的问题
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我现在手上有一个需要鉴定的小鼠单抗，但是查资料显示这种蛋白只在鼠脑中表达，表达大小为25kd。但问题是我如果用鼠脑的组织样转膜做western，显色时鼠脑中的IgG轻重链也一起显示（大概55kd/25kd），就没办法确定我的鼠抗是不是阳性，不知道该怎么解决？ [ Last edited by cheo163 on 2010-9-3 at 16:30 ] |
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5楼2010-09-03 20:58:38
dianaofyezi
金虫 (正式写手)
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- 帖子: 721
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- 专业: 免疫生物学
3楼2010-09-03 17:38:17
4楼2010-09-03 20:40:47
dianaofyezi
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cheo163(金币+1):我目前正打算这么做，看看结果怎么样吧，希望有更好的方法 2010-09-03 23:03:14
scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-09-03 23:13:34
cheo163(金币+1):我目前正打算这么做，看看结果怎么样吧，希望有更好的方法 2010-09-03 23:03:14
scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-09-03 23:13:34
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我的印象是，不是所有的IgG能够通过血脑屏障。就像胎盘屏障一样。 所以你说的自身抗体是否能够进入鼠脑我有些怀疑。如果按照你说的他能够进入的话，是有可能在WB检测的时候检测到三条带。即H和L chain和目的带。那你可以用鼠脑直接WB，加二抗能够显色说明他分泌抗体。然后如果想分开可以用未标记的羊抗鼠二抗和你理解后的组织作用，离心，然后电泳看是否能够杂出一条带。 希望对你有帮助，也乐于与你讨论。 good luck |
6楼2010-09-03 22:45:41