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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】小鼠单抗做WB的问题
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cheo163

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】小鼠单抗做WB的问题

我现在手上有一个需要鉴定的小鼠单抗，但是查资料显示这种蛋白只在鼠脑中表达，表达大小为25kd。但问题是我如果用鼠脑的组织样转膜做western，显色时鼠脑中的IgG轻重链也一起显示（大概55kd/25kd），就没办法确定我的鼠抗是不是阳性，不知道该怎么解决？


[ Last edited by cheo163 on 2010-9-3 at 16:30 ]
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1楼 2010-09-03 16:28:21
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cheo163

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by dianaofyezi at 2010-09-03 17:38:17:



什么叫鼠脑中的IgG的H和L chain也显示，鼠脑中有抗体么？你的表述是不是想说在你用鼠脑组织作WB的时候，为什么H和L chain也看得到？

对吧，就是这样，然后怎样才能不把那个H和L chain显色出来

[ Last edited by cheo163 on 2010-9-3 at 20:45 ]
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4楼2010-09-03 20:40:47
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
1949stone(金币+1):高人指点一下 2010-09-03 19:10:57
silicare(金币+2):谢谢参与 2010-09-04 08:08:58
引用回帖:
Originally posted by cheo163 at 2010-09-03 16:28:21:
我现在手上有一个需要鉴定的小鼠单抗，但是查资料显示这种蛋白只在鼠脑中表达，表达大小为25kd。但问题是我如果用鼠脑的组织样转膜做western，显色时鼠脑中的IgG轻重链也一起显示（大概55kd/25kd），就没办法确定 ...

什么叫鼠脑中的IgG的H和L chain也显示，鼠脑中有抗体么？你的表述是不是想说在你用鼠脑组织作WB的时候，为什么H和L chain也看得到？
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52187644
3楼2010-09-03 17:38:17
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cheo163

金虫 (小有名气)
★ ★
amisking(金币+2):鼓励一下！ 2010-09-03 21:54:54
而且小鼠还不是含有自身IgG，鼠脑中也有阿，制成组织lysis时，因为要煮，就把H和L chain分开了，加了抗鼠的二抗不就显色了~~
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5楼2010-09-03 20:58:38
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
cheo163(金币+1):我目前正打算这么做，看看结果怎么样吧，希望有更好的方法 2010-09-03 23:03:14
scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-09-03 23:13:34
我的印象是，不是所有的IgG能够通过血脑屏障。就像胎盘屏障一样。
所以你说的自身抗体是否能够进入鼠脑我有些怀疑。如果按照你说的他能够进入的话，是有可能在WB检测的时候检测到三条带。即H和L chain和目的带。那你可以用鼠脑直接WB，加二抗能够显色说明他分泌抗体。然后如果想分开可以用未标记的羊抗鼠二抗和你理解后的组织作用，离心，然后电泳看是否能够杂出一条带。
希望对你有帮助，也乐于与你讨论。
good luck
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52187644
6楼2010-09-03 22:45:41
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