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zhyzx

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于蛋白纯化已有12人参与

大家帮帮忙看看
我最近在纯化一个蛋白,出现了件诡异的事情,以前纯化时目的条带大小的地方有一条很明显的条带,但最近纯化条件一样,怎么在目的条带大小的地方出现了两条条带呢?(这两条条带离得很近)

急!请各位同仁解答!谢谢!

我把图片发一下,大家看看啊



[ Last edited by zhyzx on 2010-8-24 at 17:05 ]
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zhyzx

金虫 (小有名气)

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Originally posted by puma2003 at 2010-08-22 11:31:16:
正常现象

额,那这蛋白是对的吗?后续试验还可以就这样接着做?
3楼2010-08-22 15:08:42
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zhyzx

金虫 (小有名气)

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Originally posted by 月月大可 at 2010-08-22 17:25:08:
有没有把不同批次的蛋白混合在一起?

生物物理?你不会是在点晶体吧,如果是想长晶体这样肯定不行。

蛋白中有几个Cys?

没有混在一起呢,只有一个Cys
10楼2010-08-23 14:11:42
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zhyzx

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 无风的小屋 at 2010-08-22 18:16:15:
什么蛋白啊,有些蛋白质的两个亚基在电泳时会分开

一个解螺旋酶,好像只有一条链,没有亚基
11楼2010-08-23 14:12:35
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zhyzx

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by puma2003 at 2010-08-22 22:35:58:

你是过柱子?

是的,自己手动过的镍柱
12楼2010-08-23 14:13:11
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zhyzx

金虫 (小有名气)

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Originally posted by gaogaoxing at 2010-08-23 15:42:17:
不像是蛋白中亚基断开了,电泳时操作是否规范啊?

电泳操作应该没问题的
15楼2010-08-23 19:25:01
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zhyzx

金虫 (小有名气)

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Originally posted by gene001 at 2010-08-23 08:39:30:
你的蛋白质有没有带有信号肽等结构?要是有可能某些过程导致了部分蛋白的信号肽的切除,出现了大小相近的两条带!

这个还真不清楚呢,请教一下,这个怎么看呢?
16楼2010-08-23 19:25:45
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zhyzx

金虫 (小有名气)

silicare:期待你的western结果 2010-08-24 18:32:22
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Originally posted by bunny0512 at 2010-08-23 09:39:43:
做WESTERN看看吧..

恩,这倒是一种办法,可以考虑
17楼2010-08-23 19:26:18
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金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by fjinliu at 2010-08-24 10:02:33:
可能部分蛋白发生了糖基化修饰,和没发生修饰的部分会相比大小可能会有点变化的!如果是这种情况,就算是做Western 也同样会出现两条条带!

那如果是这种情况的话,该怎么办呢?
20楼2010-08-24 16:59:10
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zhyzx

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by rinp at 2010-08-24 10:20:36:
我觉得楼主可以把这两条带都切下来打下质谱看看是否同一个蛋白,如果是的话考虑该蛋白是不是有什么修饰或者少量降解导致出现了两条带,话说你这个很近到底有多进?1,2个kD?还是更少or更多
如果不是同一个蛋白就 ...

我把图片发出来了,大概80kD左右,其实是想做一下这个蛋白的活性的,如果没有活性,做下去的意义不大,现在就坐质谱的话有点浪费。
之前已近纯化过好几次了,开始的时候是只有一条带的,最近做的2次都是这种两条带的。
21楼2010-08-24 17:01:26
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