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beibei7866

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】农杆菌培养

质粒转化农杆菌时,为什么过了很长时间才长出来,要么就是长出来后做了菌落PCR呈现阳性,小摇时为什么总是摇不起来?非常纳闷,请帮忙回答。
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美夏时代

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
农杆菌小摇能摇起来,大摇就不行

发自小木虫Android客户端
5楼2017-03-13 14:51:56
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ben1147

木虫 (正式写手)

农杆菌本来就长得慢啊
涂了板子得2-3天长呢

液体培养也要1-2天
2楼2010-08-14 22:12:22
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beibei7866

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-08-14 22:12:22:
农杆菌本来就长得慢啊
涂了板子得2-3天长呢

液体培养也要1-2天

涂板是2-3天长出来了,菌P过后小摇3天还没有一点浑浊,抗生素没有加错。不知道怎么了。
3楼2010-08-15 19:31:44
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怎么都行

银虫 (小有名气)

beibei7866(金币+2): 2010-08-16 13:09:05
不知道你用的是4404还是EHA105,后者长的的确是比较慢的。至于你说的阳性克隆在液体培养基中不生长的问题,有两种可能:
1  抗生素浓度过高或用错了抗生素。
2  菌落PCR结果是假阳性。不知你在菌落PCR时用的是什么引物,尽量不要用扩增这个片段的特异性引物,因为微量的PCR产物残留就会导致假阳性的结果。最好是正向引物用载体上的测序引物,反向引物用特异性引物。但是反应条件需要摸索(主要是组合引物对的最适退火温度)。也可以直接用载体上的引物对。
4楼2010-08-15 19:49:18
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