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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】农杆菌培养
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beibei7866

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】农杆菌培养

质粒转化农杆菌时，为什么过了很长时间才长出来，要么就是长出来后做了菌落PCR呈现阳性，小摇时为什么总是摇不起来？非常纳闷，请帮忙回答。
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1楼 2010-08-14 21:22:51
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beibei7866

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-08-14 22:12:22:
农杆菌本来就长得慢啊
涂了板子得2-3天长呢

液体培养也要1-2天

涂板是2-3天长出来了，菌P过后小摇3天还没有一点浑浊，抗生素没有加错。不知道怎么了。
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3楼2010-08-15 19:31:44
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ben1147

木虫 (正式写手)
农杆菌本来就长得慢啊
涂了板子得2-3天长呢

液体培养也要1-2天
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2楼2010-08-14 22:12:22
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怎么都行

银虫 (小有名气)
beibei7866(金币+2): 2010-08-16 13:09:05
不知道你用的是4404还是EHA105，后者长的的确是比较慢的。至于你说的阳性克隆在液体培养基中不生长的问题，有两种可能：
1  抗生素浓度过高或用错了抗生素。
2  菌落PCR结果是假阳性。不知你在菌落PCR时用的是什么引物，尽量不要用扩增这个片段的特异性引物，因为微量的PCR产物残留就会导致假阳性的结果。最好是正向引物用载体上的测序引物，反向引物用特异性引物。但是反应条件需要摸索（主要是组合引物对的最适退火温度）。也可以直接用载体上的引物对。
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4楼2010-08-15 19:49:18
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美夏时代

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
农杆菌小摇能摇起来，大摇就不行

发自小木虫Android客户端
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5楼2017-03-13 14:51:56
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