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beibei7866

银虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】农杆菌培养

质粒转化农杆菌时，为什么过了很长时间才长出来，要么就是长出来后做了菌落PCR呈现阳性，小摇时为什么总是摇不起来？非常纳闷，请帮忙回答。

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1楼2010-08-14 21:22:51

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怎么都行

银虫 (小有名气)

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beibei7866(金币+2): 2010-08-16 13:09:05

不知道你用的是4404还是EHA105，后者长的的确是比较慢的。至于你说的阳性克隆在液体培养基中不生长的问题，有两种可能：
1 抗生素浓度过高或用错了抗生素。
2 菌落PCR结果是假阳性。不知你在菌落PCR时用的是什么引物，尽量不要用扩增这个片段的特异性引物，因为微量的PCR产物残留就会导致假阳性的结果。最好是正向引物用载体上的测序引物，反向引物用特异性引物。但是反应条件需要摸索（主要是组合引物对的最适退火温度）。也可以直接用载体上的引物对。