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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒提取问题求助
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wkl1984

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒提取问题求助 已有6人参与

为什么在提取质粒中，加入70%乙醇时看到了沉淀，但是加入TE后琼脂糖电泳检测不到？后经PCR也没有质粒，不知道什么原因，请大家帮忙分析。
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1楼 2010-07-29 21:22:36
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-07-29 23:20:21
会不会是吸上清的时候不小心将沉淀吸走了。吸得时候尽量轻柔。
PS：提质粒为啥还手提咧，Kit也便宜，不一定比你配试剂用的药品贵。
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Thank-you，so-blue.
2楼2010-07-29 23:18:36
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liyong1981

金虫 (正式写手)
你的沉淀不一定是质粒的，蛋白也是有可能的~特别是你的菌液浓度很大的时候~
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3楼2010-07-30 11:51:58
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hyhyyl

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
多练习几次就好了
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希望成为大家的好朋友
4楼2010-07-30 12:42:37
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louli

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是不是你混匀的时候太用力了 基因组破裂了啊 你是手提还是试剂盒啊
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5楼2010-07-30 15:53:31
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-07-31 06:01:11
1. 先做菌落PCR,再摇菌提质粒
2.手提质粒完全可以，只要动作轻柔，快。有的柱子提7、8k以上的质粒产量很低，还不如手提。
3. lz说的沉淀估计含有很多蛋白，可能是菌液太多，通常收集3ml菌液即可。
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6楼2010-07-30 18:21:50
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wkl1984

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by louli at 2010-07-30 15:53:31:
是不是你混匀的时候太用力了 基因组破裂了啊 你是手提还是试剂盒啊

手提的，不知道为什么，第一次提到了，同样操作后面没有提到，郁闷啊。
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7楼2010-08-01 21:31:07
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louli

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by wkl1984 at 2010-08-01 21:31:07:

手提的，不知道为什么，第一次提到了，同样操作后面没有提到，郁闷啊。

你混匀的时候清点，要是有条件的话还是用试剂盒吧，250次的大约550元钱
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8楼2010-08-02 09:52:37
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