| 查看: 3288 | 回复: 27 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
zhangwuhui铜虫 (小有名气)
|
[交流]
【求助/交流】基因克隆实验为非目的片段？ 已有16人参与
|
||
|
克隆实验问题 1、以cDNA为模板做PCR反应，得到的产物和预期的长度一样。 2、再用pMD-19载体连接目的片段，之后液体LB（含氨苄）200转震荡培养1-2小时，取300微升倒在LB平板培养24小时左右，以阳性菌落长到直径1-2毫米为止；再挑3-5个阳性单克隆放大培养24小时左右。 3、裂解菌体，4°C ，12 000 g ，离心20-30分钟，得到质粒。 4、PCR检测所得质粒（引物为M13-47, RV-M），得到了目的片段大小的产物（稍长些）。 5、送质粒测序（使用通用引物M13-47），但是测序结果却是如下其概况：在载体插入点之间的序列BLAST后，显示为杆菌等细菌的片段，共送了10个样品均是如此（本实验应该是动物的序列），看来不是空载，难道是载体连接上了细菌的一段序列，为什么会插入细菌片段呢，而且长度就这么巧！还是其他什么原因呢，恳请赐教！ [ Last edited by zhangwuhui on 2010-7-29 at 18:31 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有198人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 重金求助基因克隆与功能验证方向 中文摘要350字左右翻译成英语 急！ 急！ 急！在线等
已经有3人回复
- 如何从基因组中扩增出一长5kb的片断进行克隆
已经有5人回复
- 求助！大片段4kb左右基因PCR克隆方法
已经有15人回复
- 大片段基因克隆
已经有15人回复
- 请问能不能仅克隆单一基因的一小片段
已经有4人回复
- 基因克隆问题~~
已经有5人回复
- 【求助/交流】基因克隆实验设计
已经有6人回复
- 【求助/交流】求助：做基因克隆表达的时候，怎么选基因？
已经有7人回复
- 【求助/交流】基因做表达实验必须要克隆全长吗？
已经有7人回复
- 【求助/交流】基因克隆
已经有5人回复
- 【求助/交流】目的基因克隆总不成功
已经有5人回复
- 【求助/交流】只知道基因功能，但不知序列位置，怎样克隆目的基因
已经有8人回复
- 【求助/交流】求助基因克隆方面的问题解决方案
已经有17人回复
- 【求助/交流】关于目的基因的克隆
已经有12人回复
6楼2010-07-27 11:00:13
sunyongle1
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2638.8
- 散金: 1
- 帖子: 413
- 在线: 103.8小时
- 虫号: 1059232
- 注册: 2010-07-17
- 专业: 肿瘤发生
2楼2010-07-25 21:02:34
jhon86
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1259.8
- 散金: 47
- 帖子: 87
- 在线: 191.3小时
- 虫号: 896554
- 注册: 2009-11-07
- 性别: GG
- 专业: 生物医用高分子材料
3楼2010-07-25 23:03:21
yujiaping1
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1365.2
- 散金: 10
- 红花: 5
- 帖子: 1174
- 在线: 66.6小时
- 虫号: 929883
- 注册: 2009-12-17
- 性别: MM
- 专业: 疫苗学
4楼2010-07-25 23:28:53
