| 查看: 2549 | 回复: 27 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
zhangwuhui铜虫 (小有名气)
|
[交流]
【求助/交流】基因克隆实验为非目的片段？ 已有16人参与
|
||
|
克隆实验问题 1、以cDNA为模板做PCR反应，得到的产物和预期的长度一样。 2、再用pMD-19载体连接目的片段，之后液体LB（含氨苄）200转震荡培养1-2小时，取300微升倒在LB平板培养24小时左右，以阳性菌落长到直径1-2毫米为止；再挑3-5个阳性单克隆放大培养24小时左右。 3、裂解菌体，4°C ，12 000 g ，离心20-30分钟，得到质粒。 4、PCR检测所得质粒（引物为M13-47, RV-M），得到了目的片段大小的产物（稍长些）。 5、送质粒测序（使用通用引物M13-47），但是测序结果却是如下其概况：在载体插入点之间的序列BLAST后，显示为杆菌等细菌的片段，共送了10个样品均是如此（本实验应该是动物的序列），看来不是空载，难道是载体连接上了细菌的一段序列，为什么会插入细菌片段呢，而且长度就这么巧！还是其他什么原因呢，恳请赐教！ [ Last edited by zhangwuhui on 2010-7-29 at 18:31 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有158人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 重金求助基因克隆与功能验证方向 中文摘要350字左右翻译成英语 急！ 急！ 急！在线等
已经有3人回复
- 如何从基因组中扩增出一长5kb的片断进行克隆
已经有5人回复
- 求助！大片段4kb左右基因PCR克隆方法
已经有15人回复
- 大片段基因克隆
已经有15人回复
- 请问能不能仅克隆单一基因的一小片段
已经有4人回复
- 基因克隆问题~~
已经有5人回复
- 【求助/交流】基因克隆实验设计
已经有6人回复
- 【求助/交流】求助：做基因克隆表达的时候，怎么选基因？
已经有7人回复
- 【求助/交流】基因做表达实验必须要克隆全长吗？
已经有7人回复
- 【求助/交流】基因克隆
已经有5人回复
- 【求助/交流】目的基因克隆总不成功
已经有5人回复
- 【求助/交流】只知道基因功能，但不知序列位置，怎样克隆目的基因
已经有8人回复
- 【求助/交流】求助基因克隆方面的问题解决方案
已经有17人回复
- 【求助/交流】关于目的基因的克隆
已经有12人回复
6楼2010-07-27 11:00:13