24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

maggie3277

木虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2414.7
帖子: 154
在线: 47.1小时
虫号: 574576
注册: 2008-06-16
性别: MM
专业: 细胞生物学

[交流] 【求助/交流】蛋白诱导表达不出目标条带已有22人参与

请教各位虫友，最近做重组蛋白的表达。但在大肠杆菌内重组的pet28a总表达不出我的目标条带，IPTG诱导浓度也设置了梯度，温度也设定了梯度。但就是没有我的目标条带的生成。请问有虫友遇到过类似情况，构建好的质粒却表达不出条带的情况吗？

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

蛋白诱导不能表达！已经有21人回复
IPTG诱导后，考染后什么蛋白条带都没有已经有12人回复
原核表达蛋白诱导不出来已经有16人回复
怎么提高诱导表达的目的蛋白含量已经有14人回复
渗透冲击法裂解诱导后的E.coli BL21(DE3)，提纯HIS-tag蛋白，求指导已经有12人回复
外源蛋白诱导表达量特别少，求大侠解惑已经有10人回复
【求助/交流】基因工程菌诱导蛋白表达的问题已经有14人回复
【求助/交流】蛋白酶在大肠杆菌表达在牛奶平板上有透明圈，液体诱导却无酶活已经有5人回复
【求助/交流】诱导pkd46质粒表达不出目的蛋白已经有12人回复
【求助/交流】蛋白诱导问题咨询已经有13人回复
蛋白诱导已经有10人回复

1楼 2010-07-23 22:04:49

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

sqhnsd

金虫 (正式写手)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 515.3
散金: 100
帖子: 412
在线: 56.9小时
虫号: 1045397
注册: 2010-06-22
性别: GG
专业: 蛋白质组学

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-09-19 12:43:35

可能你的基因根本不在Ecoli表达。但是要回答这个问题，你首先要确定：
1.测序是否正确？
2.即使有信号肽，标签是在N-terminal or C-terminal，如果前者，应该不会分泌表达。
3.是否是沉淀？
如果不是，可以考虑用GST-tag的标签，GST比较大，蛋白得可溶性和可表达性都会增加（这个原理貌似大的标签使蛋白在翻译的时候很容易通过，这个只是别人的经验）

赞一下(2人)