24小时热门版块排行榜    

查看: 4679  |  回复: 41
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

maggie3277

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】蛋白诱导表达不出目标条带 已有22人参与

请教各位虫友,最近做重组蛋白的表达。但在大肠杆菌内重组的pet28a总表达不出我的目标条带,IPTG诱导浓度也设置了梯度,温度也设定了梯度。但就是没有我的目标条带的生成。请问有虫友遇到过类似情况,构建好的质粒却表达不出条带的情况吗?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sqhnsd

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-09-19 12:43:35
可能你的基因根本不在Ecoli表达。但是要回答这个问题,你首先要确定:
1.测序是否正确?
2.即使有信号肽,标签是在N-terminal or C-terminal,如果前者,应该不会分泌表达。
3.是否是沉淀?
如果不是,可以考虑用GST-tag的标签,GST比较大,蛋白得可溶性和可表达性都会增加(这个原理貌似大的标签使蛋白在翻译的时候很容易通过,这个只是别人的经验)
36楼2010-08-10 10:27:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 42 个回答

小白3521

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-07-23 23:53:32
测序正确吗?或者换一种表达菌株试一试看
2楼2010-07-23 23:28:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-07-24 06:18:43
LS说的对,你测序结果好么?
我一直不太喜欢28,更喜欢30点,呵呵
3楼2010-07-24 00:11:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunyongle1

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):感谢分享经验~~ 2010-07-24 12:45:46
我也遇到过一次,而且片段不是很长的那种。原来我用全长序列倒是表达出来了,只是量很低。后来就用了部分片段,没想到,就没有了。也不知道什么原因。
建议:首先保证测序正确(其实只要不发生移码突变之类,也应该表达出来啊);你的序列是不是有稀有密码子;你的序列疏水区,信号肽,跨膜域这些都会影响表达;蛋白很大的话,也会影响它的表达。
不知道楼主是用来干什么呢?制备抗原,分析酶活?
4楼2010-07-24 08:04:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见