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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】什么会造成质粒的丢失？
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黎亚丽

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】什么会造成质粒的丢失？ 已有21人参与

我现在在做连接转化，为什么转化后提不出质粒来呢？难道是质粒丢失了？我想知道大家有没有关于质粒丢失这方面的书或者网站什么的？
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1楼 2010-07-07 17:03:11
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lixg

铁杆木虫 (正式写手)
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看天(金币+1):谢谢交流 2010-07-07 18:05:03
转化后应先做菌落PCR，再摇菌提质粒。如果你已做菌落PCR且呈阳性，但提不出质粒，那就是假阳性。不存在质粒丢失的问题。
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6楼2010-07-07 17:58:06
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普通回帖

lstt09nk

铁杆木虫 (职业作家)

小堂
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看天(金币+1):鼓励交流 2010-07-07 18:04:48
不是质粒丢失，是根本就没转进去啊~~
你再回头看看你的操作有没有问题吧
或者是连接酶连接好~
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坚持能无数次改变人生的风景，因为只要路是对的，就不怕远~~~
2楼2010-07-07 17:08:15
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旋木晴晴

金虫 (小有名气)

妞妞
★
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你没验证是否转进去就提质粒:dnd:
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3楼2010-07-07 17:26:01
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tuobaohua

荣誉版主 (文坛精英)

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优秀版主
★
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极大可能是质粒根本就没有转接进去
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4楼2010-07-07 17:45:45
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zemin_fang

木虫 (正式写手)
★
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质粒没有转进去导致的假阳性
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5楼2010-07-07 17:48:11
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wywangying169

银虫 (小有名气)

空载了！
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好好自学，好好工作
7楼2010-07-08 11:16:00
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

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杂菌 or  recA+重组
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8楼2010-07-08 11:20:46
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
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看天(金币+1):鼓励交流 2010-07-08 13:22:36
转化涂板后PCR鉴定结果为阳性，建议将阳性克隆重新划平板，然后pcr鉴定，可减少假阳性几率。因为第一次的板子上会有很多未转进去的质粒，导致敏感的PCR反应阳性。
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
9楼2010-07-08 13:02:46
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violet.zhou

木虫 (小有名气)
★
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连接成功后有转化子长出，挑几个单菌落做PCR快检看是否连接成功，然后再摇菌提质粒。
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10楼2010-07-08 13:31:58
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