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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】什么会造成质粒的丢失？
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lwq652

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
假阳性，有没有做对照试验啊？
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一念错，便觉百行皆非，防之当如渡海浮囊，勿容一针之罅漏
11楼2010-07-08 14:16:29
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黎亚丽

新虫 (小有名气)

好的

引用回帖:
Originally posted by lstt09nk at 2010-07-07 17:08:15:
不是质粒丢失，是根本就没转进去啊~~
你再回头看看你的操作有没有问题吧
或者是连接酶连接好~

好的，谢谢提醒！但是我做菌落PCR能扩出来呀！
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12楼2010-07-08 14:48:44
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黎亚丽

新虫 (小有名气)

谢谢！

引用回帖:
Originally posted by lwq652 at 2010-07-08 14:16:29:
假阳性，有没有做对照试验啊？

没有做对照，你说的对照是空质粒转化一下是吗？
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13楼2010-07-08 14:50:38
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黎亚丽

新虫 (小有名气)

做了。

引用回帖:
Originally posted by 旋木晴晴 at 2010-07-07 17:26:01:
你没验证是否转进去就提质粒:dnd:

连接后做的转化，在含有抗性的平板上长出菌落了，这不是初步证明转进去了吗？而且我做了菌落PCR也扩增出来了。
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14楼2010-07-08 14:52:41
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黎亚丽

新虫 (小有名气)

知道了

引用回帖:
Originally posted by tuobaohua at 2010-07-07 17:45:45:
极大可能是质粒根本就没有转接进去

但是做了菌落PCR扩增出来了呀？
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15楼2010-07-08 14:54:13
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黎亚丽

新虫 (小有名气)

知道了。

引用回帖:
Originally posted by lixg at 2010-07-07 17:58:06:
转化后应先做菌落PCR，再摇菌提质粒。如果你已做菌落PCR且呈阳性，但提不出质粒，那就是假阳性。不存在质粒丢失的问题。

谢谢，我做了菌落PCR，接下来我可以尝试一下你的办法。
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16楼2010-07-08 14:58:04
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黎亚丽

新虫 (小有名气)

知道了。

引用回帖:
Originally posted by wywangying169 at 2010-07-08 11:16:00:

空载了！

谢谢！有这个可能！
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17楼2010-07-08 14:58:58
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黎亚丽

新虫 (小有名气)

请问

引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-07-08 11:20:46:
杂菌 or  recA+重组

recA是什么意思？
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18楼2010-07-08 15:01:08
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黎亚丽

新虫 (小有名气)

谢谢！

引用回帖:
Originally posted by zhaohq1209 at 2010-07-08 13:02:46:
转化涂板后PCR鉴定结果为阳性，建议将阳性克隆重新划平板，然后pcr鉴定，可减少假阳性几率。因为第一次的板子上会有很多未转进去的质粒，导致敏感的PCR反应阳性。

知道了，很是感激你的意见。
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19楼2010-07-08 15:02:08
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黎亚丽

新虫 (小有名气)

谢谢！

引用回帖:
Originally posted by violet.zhou at 2010-07-08 13:31:58:
连接成功后有转化子长出，挑几个单菌落做PCR快检看是否连接成功，然后再摇菌提质粒。

我想问一下，就是平板抗生素的浓度必须和液体培养基的浓度一致吗？
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20楼2010-07-08 15:03:46
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