24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 977  |  回复: 13

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】基因缺失的方法 已有8人参与

最近在做缺失,用的是同源重组的方法,要缺失的基因位于质粒上,尝试过同源臂的长度40bp、60bp,600bp,未果。坛子里的虫虫们还有其他好的方法没?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liouwzh

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-05 13:52:53
zhaohq1209(金币+1):谢谢建议哦 2010-07-05 19:48:13
做的是什么菌啊,如果是大肠杆菌或则一些类似的菌可以参考这篇文献One-step inactivation of chromosomal genes in Escherichia coli K-12 using PCR products,非常方便,只能PCR引物中带有同源臂,在复制质粒的帮助下就可以敲除目的片段。
2楼2010-07-05 12:53:12
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-05 13:53:01
zhaohq1209(金币+1):谢谢建议啊 2010-07-05 19:48:22
你可以把目的菌(需要敲除目的基因的菌)和含有已经敲除该基因的质粒的菌按一定比例混合在一块,点在板子上,过夜,然后稀释涂布,筛选!

当然了也可以用RNA干扰的方法!
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2010-07-05 13:28:23
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuezhen

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
学习学习一下!
4楼2010-07-05 14:16:48
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rosalie161

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
同源臂有点短800以上吧,用高保真酶。
Rosalei.....
5楼2010-07-05 17:37:05
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
amisking(金币+2):鼓励继续交流! 2010-07-05 22:41:19
引用回帖:
Originally posted by liouwzh at 2010-07-05 12:53:12:
做的是什么菌啊,如果是大肠杆菌或则一些类似的菌可以参考这篇文献One-step inactivation of chromosomal genes in Escherichia coli K-12 using PCR products,非常方便,只能PCR引物中带有同源臂,在复制质粒的 ...

谢谢建议。看了你推荐的这篇文献,用的是pKD46质粒,缺失的染色体上的基因,可是我要缺掉的基因是在质粒上,不知能否成功。
正在试此方法,呵呵~再次感谢
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
6楼2010-07-05 19:44:58
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2010-07-05 13:28:23:
你可以把目的菌(需要敲除目的基因的菌)和含有已经敲除该基因的质粒的菌按一定比例混合在一块,点在板子上,过夜,然后稀释涂布,筛选!

当然了也可以用RNA干扰的方法!

要做的就是敲出基因,也还没有拿到敲除基因的质粒,所以无法按照你推荐的方法来操作。如果以后的实验需要的话,也可以试试,呵呵~
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
7楼2010-07-05 19:46:20
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by rosalie161 at 2010-07-05 17:37:05:
同源臂有点短800以上吧,用高保真酶。

同源臂需要那么长么?我看文献上一般都是500~800bp左右。
另:为什么要高保真酶呢?
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
8楼2010-07-05 19:47:14
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaokaimrt

新虫 (小有名气)

路过路过
9楼2010-07-05 20:16:47
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mgangle

铁杆木虫 (著名写手)

乐乐家族-----乐颠颠


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by zhaohq1209 at 2010-07-05 19:47:14:

同源臂需要那么长么?我看文献上一般都是500~800bp左右。
另:为什么要高保真酶呢?

估计是要你保证序列的正确,你是不是可以考虑构建反向重复的载体?
麦兜麦兜~~~我要一碗鱼丸粗面。。对不起,么有鱼丸粗面。。那,我要鱼丸么有鱼丸那,我要粗面…………么有粗面那,我要鱼丸粗面……………………
10楼2010-07-08 20:52:45
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhaohq1209 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 26考研调剂0710 0860 +9 补补不补 2026-04-03 14/700 2026-04-04 23:32 by 果冻大王
[考研] 298分 070300求调剂 +13 zwen03 2026-04-02 13/650 2026-04-04 23:13 by 无际的草原
[考研] 344材料与化工调剂 +9 调剂上岸玘 2026-04-03 9/450 2026-04-04 23:10 by happyddm
[考研] 一志愿上海大学生物学346 +3 上海大学346调剂 2026-04-03 3/150 2026-04-04 20:20 by dongzh2009
[考研] 调剂 +9 19945159693 2026-04-03 10/500 2026-04-04 20:16 by dongzh2009
[考研] 化学调剂 +12 艾志恒 2026-04-03 13/650 2026-04-04 20:11 by xhai2011
[考研] 292求调剂 +21 是妍子也是研子 2026-03-30 22/1100 2026-04-03 21:44 by qlm5820
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +5 崔wj 2026-04-03 5/250 2026-04-03 15:06 by arrow8852
[考研] 285求调剂 +7 AZMK 2026-04-02 9/450 2026-04-03 11:12 by wanwan00
[考研] 296求调剂 +4 sdhu 2026-04-02 4/200 2026-04-02 21:29 by baoball
[考研] 0856材料与化工调剂,339 +14 10213207 2026-03-31 14/700 2026-04-02 21:01 by 1104338198
[考研] 一志愿上海海洋大学083200食品学硕,求调剂,接受其他专业 +6 what张 2026-04-01 7/350 2026-04-02 16:48 by zzsw+
[考研] 346求调剂 +5 郑诚乐 2026-04-02 5/250 2026-04-02 16:38 by SZW_UJN
[考研] 327求调剂 +9 汲亦昊 2026-03-29 9/450 2026-04-02 11:44 by 运气yunqi
[考研] 322求调剂 +5 熹僖XX 2026-03-31 6/300 2026-04-02 10:08 by 求调剂zz
[考研] 江苏科技大学招材料研究生 +4 Su032713. 2026-04-01 5/250 2026-04-01 22:03 by cccchenso
[考研] 085600,321分求调剂 +13 大馋小子 2026-03-31 13/650 2026-04-01 12:35 by chemdavid
[考研] 0855机械初试280求调剂 +3 kazenotori 2026-03-31 3/150 2026-04-01 10:08 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 南京航空航天大学 ,080500材料科学与工程学硕 +10 @taotao 2026-03-31 11/550 2026-04-01 09:43 by xiayizhi
[考研] 11408总分309,一志愿东南大学求调剂,不挑专业 +5 天赋带到THU 2026-03-29 6/300 2026-03-30 20:49 by dick_runner
信息提示
请填处理意见