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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】基因缺失的方法
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by mgangle at 2010-07-08 20:52:45:


估计是要你保证序列的正确，你是不是可以考虑构建反向重复的载体？

能否详细解释一下反向重复的载体？
谢谢！
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
11楼2010-07-09 08:07:25
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mgangle

铁杆木虫 (著名写手)

乐乐家族-----乐颠颠
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):很热心，欢迎常来生物版~~ 2010-07-09 10:16:27
zhaohq1209(金币+1):谢谢解释。我想暂时还不用这个方法，以后需要的话再向您请教。 2010-07-10 18:27:47
引用回帖:
Originally posted by zhaohq1209 at 2010-07-09 08:07:25:

能否详细解释一下反向重复的载体？
谢谢！

我不知道是否能适用于你的实验，其实就是利用RNAi使基因沉默，

如有序列 ATGCTAATAATTTATT一段，然后我们在后面再加上TACGATTATTAA这样就可以形成茎环  
ATGCTAATAATTTATT
TACGATTATTAA-------

双链的话就能更好的形成siRNA利用基因沉默，以上仅供参考！
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麦兜麦兜~~~我要一碗鱼丸粗面。。对不起，么有鱼丸粗面。。那，我要鱼丸么有鱼丸那，我要粗面…………么有粗面那，我要鱼丸粗面……………………
12楼2010-07-09 08:36:51
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rosalie161

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
zhaohq1209(金币+2):非常感谢你的建议。同源臂太长的的话会不会增加转化进入细胞的效率？另：用质粒作为模板扩增同源臂为什么更容易发生突变？ 2010-07-10 18:26:57
引用回帖:
Originally posted by zhaohq1209 at 2010-07-05 19:47:14:

同源臂需要那么长么？我看文献上一般都是500~800bp左右。
另：为什么要高保真酶呢？

常一点同源交换的效果会更好。关键看你的质粒有多长。用高保真酶可以减少点突变，在质粒上往下扩同源臂的话更容易突变。
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Rosalei.....
13楼2010-07-10 17:40:58
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nklyw

木虫 (正式写手)
我最近也在做缺失，但是一直失败~~~~
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14楼2010-08-04 15:22:12
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