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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

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[交流] 【求助/交流】基因缺失的方法已有8人参与

最近在做缺失，用的是同源重组的方法，要缺失的基因位于质粒上，尝试过同源臂的长度40bp、60bp，600bp，未果。坛子里的虫虫们还有其他好的方法没？

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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。

1楼 2010-07-05 11:00:11

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rosalie161

金虫 (正式写手)

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
zhaohq1209(金币+2):非常感谢你的建议。同源臂太长的的话会不会增加转化进入细胞的效率？另：用质粒作为模板扩增同源臂为什么更容易发生突变？ 2010-07-10 18:26:57

引用回帖:

Originally posted by zhaohq1209 at 2010-07-05 19:47:14:

同源臂需要那么长么？我看文献上一般都是500~800bp左右。
另：为什么要高保真酶呢？

常一点同源交换的效果会更好。关键看你的质粒有多长。用高保真酶可以减少点突变，在质粒上往下扩同源臂的话更容易突变。

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Rosalei.....

13楼2010-07-10 17:40:58

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liouwzh

木虫 (正式写手)

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-05 13:52:53
zhaohq1209(金币+1):谢谢建议哦 2010-07-05 19:48:13

做的是什么菌啊，如果是大肠杆菌或则一些类似的菌可以参考这篇文献One-step inactivation of chromosomal genes in Escherichia coli K-12 using PCR products，非常方便，只能PCR引物中带有同源臂，在复制质粒的帮助下就可以敲除目的片段。

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2楼2010-07-05 12:53:12

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