应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 急！互补不回去，应该怎么办？
61/1返回列表
查看: 1528  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看

小小_木虫

木虫 (小有名气)

[求助] 急！互补不回去，应该怎么办？

枯草芽孢杆菌，利用基因同源重组的方法将基因组中的A基因缺失掉，缺失后的性状比较明显，抑菌活性明显下降。但是做互补时，却始终都互补不回去：我用的是pHY300PLK质粒做载体，连入完整的A基因片段后，电击转入枯草芽孢杆菌菌株中，然后就测定是否互补回去。不知道我的方法是否有误？恳请高手指点……
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-04-27 10:02:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3, EPI+1): good 2011-04-27 13:13:31
首先你要确定你的基因连接没有什么问题，一定要验证正确。
基因连入重组载体后，基因启动子的方向是不是和载体上强启动子方向一致呢？还有你的基因有没有启动子？
如果不行，就换载体。
可以用诱导剂试试，但是一般过量表达载体上的强启动子是不需要诱导剂诱导的，可是有时并不一定的。。。
还有过量表达载体的表达也需要一定的时间，可以把时间延长一下。
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-04-27 12:31:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小_木虫

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-04-27 12:31:43:
首先你要确定你的基因连接没有什么问题，一定要验证正确。
基因连入重组载体后，基因启动子的方向是不是和载体上强启动子方向一致呢？还有你的基因有没有启动子？
如果不行，就换载体。
可以用诱导剂试试，但是 ...

非常感谢！，祝工作顺利！
赞一下 回复此楼
3楼2011-04-27 14:26:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

地主的小长工

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): good! 2011-04-28 15:09:06
小小_木虫(金币+1): 你好，请问：如果确认没有问题，那可能是什么呢？谢谢！ 2011-04-28 15:46:28
1.首先确认一下这个基因外源表达后，是不是真的表达了，可以用RT检测基因是否转录，或者用WB检测蛋白是否表达。如果确认没有问题，那可能是：
2.抑菌活性明显下降，可能不是基因本身确实引起的，而是在缺失的过程中，影响的周围的基因的表达所引起的。
赞一下(1人) 回复此楼
天天开心
4楼2011-04-28 13:55:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

地主的小长工

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 理论知识和实际经验都很强，有前途~ 2011-04-29 23:49:21
你先看看这个基因你缺失的部分，是否和别的基因的编码区，转录起始区，转录终止区有重叠，如果有，就很有可能影响了周围基因的表达；还有和别的基因如果在同一个操纵子内，它的缺失也会影响周围基因的表达，还有个问题，会不会你的基因缺失或者过表达之后的表型是一样的，我实验室有个同学就做了这样一个基因，它缺失和大量表达的变型是一致的，而少量表达之后可以回复这个表型。
赞一下(1人) 回复此楼
天天开心
5楼2011-04-29 22:33:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yiner

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 地主的小长工 at 2011-04-29 22:33:19
你先看看这个基因你缺失的部分，是否和别的基因的编码区，转录起始区，转录终止区有重叠，如果有，就很有可能影响了周围基因的表达；还有和别的基因如果在同一个操纵子内，它的缺失也会影响周围基因的表达，还有个问 ...

请问少量表达怎么做啊
赞一下 回复此楼
fighting!!!!
6楼2017-04-27 10:26:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小小_木虫 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭