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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】基因缺失的方法 已有8人参与

最近在做缺失,用的是同源重组的方法,要缺失的基因位于质粒上,尝试过同源臂的长度40bp、60bp,600bp,未果。坛子里的虫虫们还有其他好的方法没?
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我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2010-07-05 13:28:23:
你可以把目的菌(需要敲除目的基因的菌)和含有已经敲除该基因的质粒的菌按一定比例混合在一块,点在板子上,过夜,然后稀释涂布,筛选!

当然了也可以用RNA干扰的方法!

要做的就是敲出基因,也还没有拿到敲除基因的质粒,所以无法按照你推荐的方法来操作。如果以后的实验需要的话,也可以试试,呵呵~
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
7楼2010-07-05 19:46:20
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liouwzh

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-05 13:52:53
zhaohq1209(金币+1):谢谢建议哦 2010-07-05 19:48:13
做的是什么菌啊,如果是大肠杆菌或则一些类似的菌可以参考这篇文献One-step inactivation of chromosomal genes in Escherichia coli K-12 using PCR products,非常方便,只能PCR引物中带有同源臂,在复制质粒的帮助下就可以敲除目的片段。
2楼2010-07-05 12:53:12
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-05 13:53:01
zhaohq1209(金币+1):谢谢建议啊 2010-07-05 19:48:22
你可以把目的菌(需要敲除目的基因的菌)和含有已经敲除该基因的质粒的菌按一定比例混合在一块,点在板子上,过夜,然后稀释涂布,筛选!

当然了也可以用RNA干扰的方法!
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2010-07-05 13:28:23
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rosalie161

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
同源臂有点短800以上吧,用高保真酶。
Rosalei.....
5楼2010-07-05 17:37:05
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