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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】表达载体构建不成功的原因
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王雨云

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】表达载体构建不成功的原因 已有15人参与

目前在构建一个表达载体，经同样双酶切的目的基因和PPICZA已经获得，且表达载体是从以前构建好的载体中酶切下来的，所以不存在没切开的问题。现在将目的基因跟PPICZA连接，用了T4 连接酶和Solution1分别连接过，都能长菌，但没有要的阳性克隆，每次转化后摇24小时才能长出来，且可以长很多菌，但单菌落很小。感受态是没有问题的，实在不知道问题出在哪里，已经重复很多次了，都得不到成功的转化子。（以前成功将该目的基因与PPICZA连接过，但目的基因未去除信号肽）望大家来分享一下你们的宝贵经验！
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1楼 2010-06-08 20:38:15
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构建载体

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
小丹木木(金币+2): 鼓励新虫回帖，原主题始发表时间较早，建议自己重新发表新主题 2012-02-13 10:40:42
我现在也是遇到了同样的问题，双酶切之后连接已经好几个月了，一直不成功，几乎是所有的可能因素都考虑到了，就是做不出来，都快疯了，希望我们可以探讨互相交流下
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22楼2012-02-13 09:36:12
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