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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于RNA提取后DNaseⅠ的处理
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dongfangzz

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于RNA提取后DNaseⅠ的处理 已有8人参与

三个问题：
1、要做Real-time PCR。总RNA提取后，RNA中DNaseⅠ的处理是常规的步骤还是可做可不做？
2、用苯酚/氯仿抽提法去除DNaseⅠ时，有资料说 加入10μl 3M的醋酸钠，250μl 冷乙醇，冰上放置10分钟。该步的冷乙醇是无水乙醇还是70％的乙醇。后面的步骤用的是70％的乙醇（标明的）。而该处没标明浓度，很迷惑！
3、问题2中的 10μl 3M的醋酸钠 ，其中的3M 是什么意思？是浓度吗？但是浓度也不是这么表示的呀？
                                                            
                                                       谢谢

[ Last edited by dongfangzz on 2010-6-4 at 12:20 ]
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1楼 2010-06-04 12:17:21
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-06-04 23:19:49
引用回帖:
Originally posted by dongfangzz at 2010-06-04 21:42:48:
谢谢各位热心答复！
想再问下一般常用的去除RNA中的DNA的方法是什么？具体步骤是什么样的?

RNase Free的DNase消化就行了
根据终体积，照着比例加buffer，加上10U左右的DNase，水补齐，37度温育半个小时差不多了
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7楼2010-06-04 21:59:53
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+3):谢谢交流 2010-06-04 13:43:12
1.理论上说RNA中没有基因组DNA污染可不做，建议做。否则残留gDNA影响定量

2.无水乙醇

3. 浓度，3M=3mol/L。M是mol/L的简称
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-06-04 12:57:25
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cqyniu

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
同意楼上的意见，一直是用M代表浓度的啊M是mol/L
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3楼2010-06-04 16:08:19
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-06-04 17:25:53
总RNA提取后，用RNA做模板，扩一下内参或表达水平高的基因，35个循环，如果无预期的带，则可不做DNaseⅠ处理。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-06-04 17:12:58
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