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chener

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】载体酶切和连接已有10人参与

请问各位高手,我的载体是用Xba I(粘性末端)和SmaI(平末端)进行双酶切的,请问我用T4 DNA连接酶和我的目的片段连接的时候,载体用不用去磷酸化,不去磷酸化载体会不会自连啊?

[ Last edited by lstt09nk on 2010-6-3 at 19:11 ]
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tomocsn

铁虫 (初入文坛)

同求+我的尝试

★ ★ ★
chener(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+2):感谢分享经验~~ 2010-06-07 14:47:01
我也遇到了这样的问题,用的是pst1 和 Ehe1酶切出的平黏端,但是尝试过好多没连上!方法有:尝试不加PEG;尝试1:3-1:15之间的一部分比例同时转化一个平板。用的是takara的t4酶。16°过夜连接。
生命不息奋斗不止
8楼2010-06-07 11:53:50
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