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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教NEB的pmeI的酶切体系
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维纳斯的骑士

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教NEB的pmeI的酶切体系 已有4人参与

同上，请教NEB的pmeI的酶切体系，最近在做一个克隆，用pmeI和EcoRI酶切，这两个酶没有共同的buffer，只能单个切，中间用纯化的方法和乙醇沉淀的方法都试过了，但是一直没挑到正确的转化子，只有一些空载质粒，大家能不能给些建议啊，谢谢！
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1楼 2010-06-02 07:21:52
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维纳斯的骑士

金虫 (小有名气)
我用的是不同公司的pmeI和EcoRI酶
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3楼2010-06-02 16:39:32
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用共同的buffer啊，buffer 4 啊。
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Thank-you，so-blue.
2楼2010-06-02 08:55:10
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
各个公司的酶差别不大，你可以用两种不同的酶，用BUFFER4，怕什么！@！！
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4楼2010-06-02 16:45:45
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
lstt09nk(金币+3):感谢交流~~ 2010-06-02 17:23:14
第一个酶单酶切之后，和第二个酶切之后都要跑电泳看看切开没有
如果最后转化结果里面只有空载体，可能是酶切不完全
酶切产物最好跑电泳切胶回收，避免没切开的质粒进入连接体系

另外就是要再看看连接体系是不是有问题
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5楼2010-06-02 16:48:10
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