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维纳斯的骑士

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教NEB的pmeI的酶切体系 已有4人参与

同上,请教NEB的pmeI的酶切体系,最近在做一个克隆,用pmeI和EcoRI酶切,这两个酶没有共同的buffer,只能单个切,中间用纯化的方法和乙醇沉淀的方法都试过了,但是一直没挑到正确的转化子,只有一些空载质粒,大家能不能给些建议啊,谢谢!
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ben1147

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
lstt09nk(金币+3):感谢交流~~ 2010-06-02 17:23:14
第一个酶单酶切之后,和第二个酶切之后都要跑电泳看看切开没有
如果最后转化结果里面只有空载体,可能是酶切不完全
酶切产物最好跑电泳切胶回收,避免没切开的质粒进入连接体系

另外就是要再看看连接体系是不是有问题
5楼2010-06-02 16:48:10
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
用共同的buffer啊,buffer 4 啊。
Thank-you,so-blue.
2楼2010-06-02 08:55:10
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维纳斯的骑士

金虫 (小有名气)

我用的是不同公司的pmeI和EcoRI酶
3楼2010-06-02 16:39:32
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liyong1981

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
各个公司的酶差别不大,你可以用两种不同的酶,用BUFFER4,怕什么!@!!
4楼2010-06-02 16:45:45
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