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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒提的量不多
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tdong06

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】质粒提的量不多 已有14人参与

我最近做了个枯草芽孢杆菌的gfp质粒的电转化，质粒电转化进去之后再从枯草芽孢杆菌里抽提质粒，抽提的量就显得很少，带很淡。与大肠中的质粒相比就差多了，不知道是什么原因？
大家帮忙分析下。。。
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1楼 2010-05-28 17:40:23
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-28 22:50:47
这很正常吧，枯草芽孢杆菌不像大肠杆菌那么容易培养吧，所以可能提出来的质粒的量就不高。
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2楼2010-05-28 18:44:26
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桂花啊

铁虫 (初入文坛)
★ ★
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scelab(金币+1):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-05-28 22:50:57
质粒电转化的效率高吗？做检测了吗？
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3楼2010-05-28 19:53:05
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tdong06

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 桂花啊 at 2010-05-28 19:53:05:
质粒电转化的效率高吗？做检测了吗？

这个与转化效率的关系应该不是很大吧？我是挑选有绿色荧光的转化子加抗生素摇的，摇了24h后那个OD达到2.0的样子，用质粒试剂盒提取质粒，平常的大肠杆菌之类都是很容易抽提得到很亮的条带，但是这个枯草芽孢杆菌是不行的。所以这个不知道是怎么回事，是不是枯草芽孢的细胞壁比较厚呢？
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4楼2010-05-28 20:47:43
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tdong06

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by snzydong at 2010-05-28 18:44:26:
这很正常吧，枯草芽孢杆菌不像大肠杆菌那么容易培养吧，所以可能提出来的质粒的量就不高。

不是的吧？这个枯草长的还是很快的。菌量不会差的啊！
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5楼2010-05-28 20:49:43
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★ ★
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reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-05-29 05:25:02
你以为其他的菌里面质粒的拷贝数都像大肠杆菌一样
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6楼2010-05-28 23:17:17
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tdong06

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by gastrodia at 2010-05-28 23:17:17:
你以为其他的菌里面质粒的拷贝数都像大肠杆菌一样

这个就不是很懂了，请赐教。。。
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7楼2010-05-29 08:31:21
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gandalf886

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
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lstt09nk(金币+2):感谢交流~~ 2010-05-29 09:28:36
穿梭质粒有两个复制起点，在大肠里的一般是pUC类型的，为高拷贝。在枯草里就不知道了，有高的也有低的，你查查你的是什么的。另外，你摇24h才提质粒，不都长成芽孢了吗？还有提质粒不加溶菌酶先处理一下吗？
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8楼2010-05-29 09:25:17
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shuixian2009

木虫 (知名作家)

优秀版主
★ ★
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lstt09nk(金币+1):欢迎交流~~ 2010-05-29 09:29:03
要加溶菌酶可能会好一些
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告别绝望 告别风中的山谷 哭是一种幸福
9楼2010-05-29 09:25:59
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xzx135

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
菌体离心的量加大
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10楼2010-05-29 10:18:47
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