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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒提的量不多
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yangjunzju

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
质粒淡的话可以用两种方法改善：1.菌液量用多一些；2.最后的EB少用一些；这样的话效果会好一些
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11楼2010-05-29 12:03:52
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tdong06

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yangjunzju at 2010-05-29 12:03:52:
质粒淡的话可以用两种方法改善：1.菌液量用多一些；2.最后的EB少用一些；这样的话效果会好一些

但是为什么和从大肠杆菌中提到的相同质粒相比，从枯草芽孢杆菌中提到的量就要少呢？带要淡呢？
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12楼2010-05-29 21:36:27
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
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lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~~ 2010-05-30 22:17:14
本人认为原因可能有二：
1、质粒在枯草杆菌的复制可能没有大肠杆菌那么多，所以应该适当的增加菌量；
2、破壁要好，那样才能最大程度的释放出质粒
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将有能量帮助他人作为自己的人生追求！
13楼2010-05-29 23:10:05
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yangjunzju

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by yangjunzju at 2010-05-29 12:03:52:
质粒淡的话可以用两种方法改善：1.菌液量用多一些；2.最后的EB少用一些；这样的话效果会好一些

相同质粒在不同宿主菌里的拷贝数应该是不一样的。。。所以在枯草杆菌中的拷贝数可能比在大肠杆菌中的要少，自然就会淡一些
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14楼2010-05-29 23:32:48
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yangjunzju

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by tdong06 at 2010-05-29 21:36:27:

但是为什么和从大肠杆菌中提到的相同质粒相比，从枯草芽孢杆菌中提到的量就要少呢？带要淡呢？

相同质粒在不同宿主菌里的拷贝数应该是不一样的。。。所以在枯草杆菌中的拷贝数可能比在大肠杆菌中的要少，自然就会淡一些
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15楼2010-05-29 23:33:35
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scien55

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是多拷贝质粒吗？能在枯草杆菌里面复制吗
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好好学习天天向上
16楼2010-05-30 00:34:35
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wangqk198738

金虫 (正式写手)

看看这个

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎分享经验~~ 2010-05-30 22:17:51
那就多离心几次菌啊，这样不就多点了，此外，放在超净台上用微风吹，多吹一会，不然水不会轻易跑掉的，这样你要的浓度就大了，我经常这么干。很好使。
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17楼2010-05-30 08:13:48
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gene001

金虫 (正式写手)

就是个普通教师
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
主要原因是枯草杆菌质粒拷贝数比较低，真要做枯草杆菌表达系统，我建议参考大肠杆菌提高质粒拷贝的方法来改造一下你的质粒载体，甚至有条件可以对菌株进行相应的遗传改良，不过这工作会比较难吧！但是真的做好了你就可以开发一个新的表达系统了！哈哈
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大家共同交流、共同提高！！！
18楼2010-05-30 09:17:12
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tdong06

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by gene001 at 2010-05-30 09:17:12:
主要原因是枯草杆菌质粒拷贝数比较低，真要做枯草杆菌表达系统，我建议参考大肠杆菌提高质粒拷贝的方法来改造一下你的质粒载体，甚至有条件可以对菌株进行相应的遗传改良，不过这工作会比较难吧！但是真的做好了你 ...

至少可以发个AEM了，呵呵。。。
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19楼2010-05-30 14:16:01
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tdong06

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wangqk198738 at 2010-05-30 08:13:48:
那就多离心几次菌啊，这样不就多点了，此外，放在超净台上用微风吹，多吹一会，不然水不会轻易跑掉的，这样你要的浓度就大了，我经常这么干。很好使。

增加菌体浓度？但是加了浓液2后，那个不透明啊！
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20楼2010-05-30 14:17:21
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