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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒提的量不多
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tdong06

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】质粒提的量不多 已有14人参与

我最近做了个枯草芽孢杆菌的gfp质粒的电转化，质粒电转化进去之后再从枯草芽孢杆菌里抽提质粒，抽提的量就显得很少，带很淡。与大肠中的质粒相比就差多了，不知道是什么原因？
大家帮忙分析下。。。
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1楼 2010-05-28 17:40:23
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yangjunzju

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by yangjunzju at 2010-05-29 12:03:52:
质粒淡的话可以用两种方法改善：1.菌液量用多一些；2.最后的EB少用一些；这样的话效果会好一些

相同质粒在不同宿主菌里的拷贝数应该是不一样的。。。所以在枯草杆菌中的拷贝数可能比在大肠杆菌中的要少，自然就会淡一些
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14楼2010-05-29 23:32:48
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-28 22:50:47
这很正常吧，枯草芽孢杆菌不像大肠杆菌那么容易培养吧，所以可能提出来的质粒的量就不高。
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2楼2010-05-28 18:44:26
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桂花啊

铁虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-05-28 22:50:57
质粒电转化的效率高吗？做检测了吗？
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3楼2010-05-28 19:53:05
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tdong06

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 桂花啊 at 2010-05-28 19:53:05:
质粒电转化的效率高吗？做检测了吗？

这个与转化效率的关系应该不是很大吧？我是挑选有绿色荧光的转化子加抗生素摇的，摇了24h后那个OD达到2.0的样子，用质粒试剂盒提取质粒，平常的大肠杆菌之类都是很容易抽提得到很亮的条带，但是这个枯草芽孢杆菌是不行的。所以这个不知道是怎么回事，是不是枯草芽孢的细胞壁比较厚呢？
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4楼2010-05-28 20:47:43
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