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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】qRT-PCR需要做不加RT的对照吗？
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maria229

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】qRT-PCR需要做不加RT的对照吗？ 已有3人参与

弱问一下，如果普通RT-PCR的预实验中已经知道不加RT是扩增不出条带的，那么在做qRT-PCR时，是不是就可以省略这组对照了呢？
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1楼 2010-05-20 12:03:43
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
maria229(金币+1):非常感谢！ 2010-05-27 15:43:09
我认为应该做不加反转录酶的对照，毕竟定量PCR灵敏度要比普通PCR高很多，但是即使定量PCR不加反转录酶的对照出现指数扩增，可能和不做对照的结果也是一致的，因为可能在拷贝数上差很多个数量级，可以忽略掉差异。不过做一下对照，还是很有必要的
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4楼2010-05-21 17:37:24
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linxi8579

铜虫 (正式写手)
★
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-05-20 19:07:35
maria229(金币+1):谢谢！ 2010-05-21 12:53:55
你说的RT指的应该就是反转的cDNA吧，做定量时当然是要加水做模板的阴性对照的啊，这样对尤其是溶解曲线的判断是必不可少的。对扩增曲线、CT值也有参考价值。
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2楼2010-05-20 18:49:48
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maria229

木虫 (著名写手)
谢谢楼上的回答，不过我指的RT是反转录酶的意思，不是普通RT-PCR都要加一个没有反转录酶而其他体系全都一样的对照进行反转录合成cDNA吗？
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3楼2010-05-21 12:54:42
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