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[交流] 【求助/交流】设计全长的引物已有3人参与

最近想做基因过表达，但是锚定起始密码子和终止密码子设计的引物都得不到目的片段所以想向起始子和终止子的两侧延伸设计引物，不知道可不可以！如果可以的话可以向两侧延伸多少个碱基设计引物呢？

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1楼 2010-05-10 17:24:04

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saturn100

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434744419(金币+1): 2010-05-10 17:33:10

应该可以的吧，可以从5‘ 或是3’UTR里面设计引物的，然后在引物的5‘端加上合适的酶切位点，连到载体上。

2楼2010-05-10 17:27:24

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gastrodia

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434744419(金币+1): 2010-05-10 17:52:41

UTR部分设计引物可能会比ATG和TGA还要难，毕竟GC含量太低，你说你使用基于ATG和tga的引物都得不到条带，你的PCR本身没问题吗？是否有阳性对照可以确保你的cDNA没问题

3楼2010-05-10 17:47:06

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★
amisking(金币+1): 2010-05-11 08:15:19

cDNA没有问题！我做了阳性对照！只是引物设计的问题！

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4楼2010-05-10 17:52:29

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怎样确定UTR区域！谢谢

5楼2010-05-10 17:54:09

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gastrodia

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你把序列发给我，我的邮箱ronghua.xu08@gmail.com
我帮你看看

6楼2010-05-10 21:31:37

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