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汕头大学海洋科学接受调剂
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catherineguo

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】50Kb以上的DNA提取方法 已有7人参与

请教:用什么方法可以提取大于50Kb的DNA呢?急!
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zxl493

铁虫 (小有名气)

★ ★
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plantaqp(金币+1):欢迎交流 2010-05-05 03:38:24
破碎细胞    再梯度离心
2楼2010-05-05 00:10:10
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zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲

★ ★
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plantaqp(金币+1):欢迎交流 2010-05-05 03:38:31
不好操作。
1、吸附膜一般是30K以下。
2、手工法能够做到,传统方法,操作注意轻柔。
3、梯度离心可以一定程度上分离部分大的片段。
3楼2010-05-05 01:50:37
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stliimoon

金虫 (小有名气)

★ ★
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scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-05-05 15:26:45
直接用传统的基因提取方法比较好吧,虽然没kit方便,只要你操作的好,肯定能提的出来的,这么大kit不一定提的出来
4楼2010-05-05 08:37:52
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catherineguo

铁虫 (初入文坛)

非常感谢各位回复!我提的是植物DNA,之前也用传统方法提了几次,枪头也剪了,离心时多数步骤只有5000rpm,但片段也就是刚大于23kb,看起来没有达到50kb。我再做做看,大家若有更好的方法,请告诉我一下。谢谢了!

另外,有没有人用过Fermentas的GeneRuler High Range DNA Ladder,ready to use.货号是SM1353?它的片段范围是10-48kb。用什么样的电泳条件及胶浓度才能跑出理想的条带呢?
5楼2010-05-05 09:46:00
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wnavy200299

金虫 (小有名气)

50kbDNA提取


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怎么这么大呢?赶上人工染色体了!换个思路想想!一般的DNA提取估计很难!
6楼2010-05-05 10:21:52
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liyong1981

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是有点大了,呵呵,加油
7楼2010-05-05 13:04:54
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快乐由自己go

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
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lstt09nk(金币+2):感谢交流~~ 2010-05-31 19:02:47
建议用凝胶包埋的方法提。可以查阅文库构建的DNA提取方法
如果技术够可以的话,普通方法温柔小心些也会得到50k,但难度很大。
8楼2010-05-05 16:13:47
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catherineguo

铁虫 (初入文坛)

谢谢各位的回复!凝胶包埋法确实可以满足我的要求,就是程序有些复杂,努力中。
9楼2010-05-31 17:40:10
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快乐由自己go

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by catherineguo at 2010-05-31 17:40:10:
谢谢各位的回复!凝胶包埋法确实可以满足我的要求,就是程序有些复杂,努力中。

大胆动手,小心操作,慢慢摸索,没问题的。
10楼2010-05-31 20:16:19
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